技術的定量原理：

擴增曲線

在Real- qPCR中，對整個(ge) PCR反應擴增過程進行了實時的檢測並記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監測到的熒光信號可以繪製成一條曲線，即為(wei) 擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為(wei) 基線期、指數增長期和平台期。

在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chan) 物量的變化，此時即為(wei) 基線期。

PCR反應過程中產(chan) 生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的，隨著反應循環數的增加，終PCR反應不再以指數形式生成模板，從(cong) 而進入“平台期"。在該時期，擴增產(chan) 物已不再呈指數級的增加，PCR的終產(chan) 物量與(yu) 起始模板量之間無線性關(guan) 係，所以根據終的PCR產(chan) 物量不能計算出初始模板量。

產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，後來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研製出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產(chan) 物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個(ge) 循環，收集一個(ge) 熒光強度信號，這樣我們(men) 就可以通過熒光強度變化監測產(chan) 物量的變化，從(cong) 而得到一條熒光擴增曲線圖。

一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個(ge) 階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數擴增階段和平台期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chan) 物量的變化。而在平台期，擴增產(chan) 物已不再呈指數級的增加，PCR 的終產(chan) 物量與(yu) 起始模板量之間沒有線性關(guan) 係，根據終的 PCR 產(chan) 物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。隻有在熒光信號指數擴增階段， PCR產(chan) 物量的對數值與(yu) 起始模板量之間存在線性關(guan) 係，我們(men) 可以選擇在這個(ge) 階段進行定量分析。為(wei) 了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩(liang) 個(ge) 非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。

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