間接法(檢測未知抗體(ti) )

1、用包被緩衝(chong) 液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。

2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體(ti) )0.05ml於(yu) 上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)

3、加酶標抗體(ti) ：於(yu) 反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(ti) (抗抗體(ti) )0.05ml，37℃孵育30-60分鍾，洗滌,最後一遍用DDW洗滌。

4、加底物液顯色：於(yu) 各反應孔中加入臨(lin) 時配製的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鍾。

5、終止反應：於(yu) 各反應孔中加入2M硫酸0.05ml

6、結果判定：可於(yu) 白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nei) 顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為(wei) 無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀(yi) 上，於(yu) 450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零後測各孔OD值，若大於(yu) 規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為(wei) 陽性。