注意事項:

１．PCR反應應該在一個(ge) 沒有DNA汙染的幹淨環境中進行。設立一個(ge) 的PCR實驗室。

２．純化模板所選用的方法對汙染的風險有極大影響。一般而言，隻要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。

３．所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的汙染。產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研操作過程中均應戴手套。

４．PCR試劑配製應使用zui高質量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。

５．試劑都應該以大體(ti) 積配製，試驗一下是否滿意，然後分裝成僅(jin) 夠一次使用的量儲(chu) 存，從(cong) 而確保實驗與(yu) 實驗之間的連續性。

６．試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應洗滌幹淨並高壓滅菌。

７．PCR的樣品應在冰浴上化開，並且要充分混勻。

PCR實驗步驟:

產(chan) 品僅(jin) 用於(yu) 科研典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與(yu) 模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應組成一個(ge) 循環，通過多次循環反應，使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是：

將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為(wei) 93℃-94℃）使其變性解成單鏈；

人工合成的兩(liang) 個(ge) 寡核苷酸引物在其合適的複性溫度下分別與(yu) 目的基因兩(liang) 側(ce) 的兩(liang) 條單鏈互補結合，兩(liang) 個(ge) 引物在模板上結合的位置決(jue) 定了擴增片段的長短；

耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從(cong) 引物的3’端開始摻入，以目的基因為(wei) 模板從(cong) 5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。