在繼續介紹的操作步驟時，我們(men) 需格外注意無菌操作與(yu) 細胞培養(yang) 環境的穩定。接下來，將詳細闡述細胞複蘇、培養(yang) 、傳(chuan) 代及凍存的關(guan) 鍵步驟：

 細胞複蘇

1. **預熱培養(yang) 基**：將含有10%胎牛血清的DMEM培養(yang) 基置於(yu) 37℃水浴鍋中預熱，確保溫度適宜細胞生長。
2. **快速解凍**：從(cong) 液氮罐中迅速取出凍存的Hela S3細胞，立即放入37℃水浴中，輕輕搖晃凍存管，使其在1分鍾內(nei) 融化。
3. **離心洗滌**：將細胞懸液轉移至15mL離心管中，加入等體(ti) 積預熱的培養(yang) 基，輕輕混勻後，以800-1000rpm的速度離心5分鍾，棄去上清以去除DMSO。
4. **重懸接種**：向細胞沉澱中加入適量預熱的培養(yang) 基，輕輕吹打製成單細胞懸液，隨後接種至已預先用培養(yang) 基潤洗的培養(yang) 皿中，置於(yu) 37℃、5% CO₂的恒溫培養(yang) 箱中培養(yang) 。
細胞培養(yang) 與(yu) 觀察

- **日常觀察**：每日使用倒置顯微鏡觀察細胞形態、生長狀態及培養(yang) 基顏色，適時更換新鮮培養(yang) 基，防止細胞汙染和營養(yang) 耗盡。
- **換液**：通常每2-3天更換一次培養(yang) 基，以維持細胞生長環境的穩定。

 細胞傳(chuan) 代

1. **消化處理**：當細胞密度達到80%-90%時，吸去舊培養(yang) 基，用PBS輕輕洗滌細胞一次，加入適量的消化液，置於(yu) 培養(yang) 箱中孵育至細胞開始變圓並脫落。
2. **終止消化**：加入含血清的培養(yang) 基終止消化，輕輕吹打使細胞脫落並分散成單細胞懸液。
3. **細胞計數與(yu) 分盤**：取少量細胞懸液進行計數，根據實驗需要調整細胞密度後，接種至新的培養(yang) 皿中繼續培養(yang) 。

細胞凍存

1. **準備凍存液**：按培養(yang) 基:血清:DMSO = 7:2:1的比例配製細胞凍存液，置於(yu) 4℃預冷。
2. **細胞收集**：同細胞傳(chuan) 代中的消化處理步驟，收集處於(yu) 對數生長期的細胞。
3. **重懸與(yu) 凍存**：將細胞懸液轉移至凍存管中，逐滴加入預冷的凍存液，邊加邊輕輕晃動，使細胞均勻分散。隨後，將凍存管放入程序降溫盒中，置於(yu) -80℃冰箱過夜，最後轉移至液氮罐中長期保存。

通過以上細致的操作步驟，可以確保Hela S3人宮頸癌細胞株在實驗室中的穩定傳(chuan) 代與(yu) 高效利用。