注意事項：

1.收到細胞後，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

2.收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精後放在培養(yang) 箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩定細胞狀態。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，並對細胞進行不同倍數拍照（建議收細胞時就整體(ti) 外觀拍一張照片，觀察培養(yang) 基的顏色和是否有漏液情況，隨後在顯微鏡下拍下細胞狀態，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有汙染情況。作為(wei) 我方進行銷售依據。

3.由於(yu) 細胞狀態受環境、操作和運輸等多方麵因素影響，故本公司隻保證客戶收到細胞後一周內(nei) 的細胞狀態，故客戶需要售後時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發現問題後客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大於(yu) 7天。

4.所有動物細胞均視為(wei) 有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台內(nei) 操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟(diu) 棄。

細胞培養(yang) 方法；

1、細胞傳(chuan) 代：細胞密度達到80-90%時即可傳(chuan) 代

①棄去培養(yang) 上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(ge) 瓶或皿，蓋好放入培養(yang) 箱消化；

③1-2min後，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況後加入*培養(yang) 基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yang) 箱繼續消化至可以輕輕吹打下為(wei) 止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yang) 基重懸後加入培養(yang) 瓶或皿中，T25培養(yang) 瓶加6-8ml培養(yang) 基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉澱重懸後分到新培養(yang) 瓶中。

2、細胞複蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yang) 基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yang) 基吹勻，將細胞懸液加入培養(yang) 瓶中，補加適量培養(yang) 基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yang) 上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min後，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況後加入*培養(yang) 基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時後將凍存管轉入液氮罐儲(chu) 存。