細胞受殺傷(shang) 性藥物作用以後，可能出現多方麵反應，細胞的形態和增殖生長的變化是晟易於(yu) 顯現的。檢測藥物對增殖的影響情況可用於(yu) 測試藥物效應的研究。本節介紹的藥物對細胞增殖影響的實驗主要包括繪製生長曲線的細胞培養(yang) 實驗、成集落的細胞培養(yang) 實驗、有絲(si) 分裂指數測定的細胞培養(yang) 實驗、縮時電影顯微攝像術的細胞培養(yang) 實驗。

一、繪製生長曲線的細胞培養(yang) 實驗

(一)試驗原理

    繪製培養(yang) 細胞的生長曲線可計數細胞增長的數值，從(cong) 而直觀地了解細胞生長與(yu) 死亡的動態變化。常用於(yu) 檢測藥物、培養(yang) 液的成分和血清等對細胞生長的影響。

(二)材料

1．待檢材料(藥物)。

2．細胞培養(yang) 成層的貼壁細胞。

3．試劑 0．25％溶液、O．02％EDTA溶液、培養(yang) 基(RPMll640或DMEM)、小牛血清、Hanks液。

4．器材25ml培養(yang) 瓶、CO2培養(yang) 箱、倒置顯微鏡、微量加樣器、血細胞計數板、對數坐標紙。

(三)買(mai) 驗方法

1.配製EDTA細胞分離液(消化液)，將0．25％溶液與(yu) 等量目0．02%EDTA溶液混合而成。

2．將單層培養(yang) 的細胞用細胞消化液進行消化，使之成為(wei) lml的細胞懸液。

3.待檢藥物處理將待檢藥物稀釋至合適作用濃度，向細胞懸液中加人一定量稍檢藥物作用8 h以上。

4.用Hanks液稀釋成10ml，取少量置血細胞計數板內(nei) 計數。將細胞懸液調節成(1～3)×105／ml，分別接種於(yu) 25ml培養(yang) 瓶中(根據實驗需要決(jue) 定接種瓶數及每瓶接種的數量)。

5．每天每組取3瓶計數，計算均值，連續計數7d。

(四)結果與(yu) 分析

    用對數坐標紙，以細胞濃度為(wei) 縱坐標，天數為(wei) 橫坐標，繪製生長曲線。

(五)注意事項

1.用懸浮培養(yang) 細胞進行此項實驗，除不用消化外，其餘(yu) 操作步驟均相同。但需離心收集細胞，再用Hanks液吹打成細胞懸液，然後計數。

2.在計數細胞期問，一般不更換培養(yang) 液。若必須更換，實驗組與(yu) 對照組均同樣更換。

3．每天細胞計數均應在相同時間進行，以便減少實驗誤差。

4.由於(yu) 計數的誤差和在操作過程中丟(diu) 失或死亡等因素的影響，應利用進入生長狀態的細胞進行實驗。除了進行此項實驗外，一般應再做分裂指數測定、成集落實驗等，互相參考。