用於(yu) 福爾馬林固定的石蠟包埋組織切片：

1、抗原熱修複 可根據實驗室的具體(ti) 條件，選用微波爐修複、高壓鍋抗原修複或水浴高溫抗原修複。抗原熱修複可選用各種緩衝(chong) 液，如TBS、PBS、重金屬鹽溶液等，但實驗證明，以0.01M枸櫞酸鹽緩衝(chong) 液（pH6.0）效果。請選用我公司提供的ZLI-9064 枸櫞酸鹽緩衝(chong) 液（粉劑）配製，取該粉劑一包溶於(yu) 1000ml的蒸餾水中，混勻，其pH值在6.0 ± 0.1，如因蒸餾水本身造成的pH值偏差，請自行調整。

（1）高壓熱修複 切片脫蠟至水。將1500ml~3000ml的0.01M緩衝(chong) 溶液（pH6.0，工作液）或0.001M EDTA（pH8.0）注入不鏽鋼壓力鍋中加熱至沸騰。切片置於(yu) 金屬架上，放入鍋內(nei) ，使切片位於(yu) 液麵以下，蓋鍋壓閥。當壓力鍋開始慢慢噴氣時（約加熱5~6分鍾後），計時1~2分鍾，然後將壓力鍋端離熱源，冷水衝(chong) 至室溫後，取下氣閥，打開鍋蓋，取出切片，蒸餾水洗後，PBS洗2分鍾×3，下接免疫組化染色步驟。

（2）煮沸熱修複 切片脫蠟至水後，放入盛有0.01M緩衝(chong) 溶液（pH6.0，工作液）的容器中，並將此容器置於(yu) 盛有一定數量自來水的大器皿中，電爐上加熱煮沸，從(cong) 小容器的溫度到達92℃~98℃起開始計時15~20分鍾，然後端離電爐，室溫冷卻20~30分鍾，蒸餾水衝(chong) 洗，PBS洗，

（3）微波熱修複。切片脫蠟至水後，3％H2O2處理10分鍾，蒸餾水洗2分鍾×3。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩衝(chong) 液（工作液）的容器中，置微波爐內(nei) 加熱使容器內(nei) 液體(ti) 溫度保持在92℃~98℃之間並持續10~15分鍾（注意：無論是使用醫用或家用微波爐，請根據具體(ti) 機型酌情設置條件，務必滿足以上步驟中對溫度和時間的要求）。取出容器，室溫冷卻10~20分鍾（注意：不可將切片從(cong) 緩衝(chong) 液中取出冷卻，以便使蛋白能夠恢複原有的空間構型）。PBS洗，下接免疫組化染色步驟。適用的有：AR，Bax，Bcl-2，C-fos，X-jun，C-kit，C-myc，E-cadherin，Chromogranin A，Cyclin，ER，Heat shock protein，HPV，Ki-67，MDMZ，p53，p34，p16，p15，P-glycoprotein，PKC，PR，PCNA，ras，Rb，TopoismeraseⅡ等。

2、酶消化方法 常用0.1%和0.4%液。使用前預熱至37℃，切片也預熱至37℃，消化時間約為(wei) 5~30分鍾（的zui終濃度可以根據使用者的要求進行調整，濃度範圍可以從(cong) 0.05%至0.25%）； 消化37℃時間為(wei) 30分鍾。皂素（Saponin）：一般使用濃度為(wei) 2~10mg/ml的saponin溶液，消化時間為(wei) 室溫孵育30分鍾。 適用於(yu) 被固定遮避的，其中有：Collagen，Complement，Cytokeratin，C-erB-2，GFAP，LCA，LN等。