鑒定抗血清質量的參數
抗血清的製備原理:
抗血清為(wei) 含有某一類具有特異免疫功能的分子的血清,一般為(wei) 動物被人工注射某抗原後製備的動物血清。價(jia) 的抗血清用於(yu) 研究工作以及疾病的診斷和治療。
抗血清的質量直接影響分析方法的特異性和靈敏度。用於(yu) 鑒定抗血清質量的參數主要有幾項:
1.親(qin) 和性(affinity)是指抗體(ti) 分子上一個(ge) 抗原結合部位與(yu) 相應的抗原決(jue) 定簇之間的結合強度,常用親(qin) 和常數Ka表示。Ka是正/逆向反應速度常數的比值,單位為(wei) 稀釋度單位(L/mol或LM-1),表示需將lmol抗體(ti) 稀釋至多少升,才能使抗原—抗體(ti) 結合下降50%;而Ka的倒數為(wei) 解離常數(Kd),其單位為(wei) 濃度單位(mol/L)。為(wei) 提高放射免疫分析的靈敏度、精密度和準確度,需選用Ka值高(109一1012L/mo1)的抗血清。
2.特異性(specificity)是指一種識別相應抗原決(jue) 定簇的能力。由於(yu) 一種抗原常有結構極相似的類似物(同類物、前體(ti) 、降解物和代謝物),其抗血清可能對該抗原的類似物產(chan) 生交叉反應。因此,抗體(ti) 的特異性通常以交叉反應率表示:將反應的zui大結合率抑製下降50%時特異性抗原與(yu) 類似物的劑量(ED50)之比來計算交叉反應率。如胰島素標準品使125I胰島素與(yu) 抗血清的zui大結合下降50%的用量為(wei) 0.5ng,而類似的物(前體(ti) )胰島素原的用量為(wei) 500ng,則相應的交叉反應率(%)為(wei) :0.5/500=0.1%。
抗體(ti) 交叉反應程度的高低直接影響測定結果的準確性,但應注意,抗血清特異性與(yu) 分析方法特異性並不*相同,因後者對某一待測抗原的特異性程度不僅(jin) 取決(jue) 於(yu) 所用抗體(ti) ,尚有賴於(yu) 標記物的質量和方法學設計。
3.效價(jia) (titer)是反映抗血清中有效抗體(ti) 含量的相對參數,即抗血清稀釋至能與(yu) 抗原發生有效反應的zui大稀釋度。通常是將一株抗血清作係列稀釋後與(yu) 標記抗原反應,計算不同稀釋度時抗體(ti) 結合標記抗原的百分率,繪製出稀釋度曲線。結合具體(ti) 方法設計要求。效價(jia) 一般指結合50%標記抗原時,抗血清的稀釋度。
上一篇 購買elisa試劑盒不得不看的那些事 下一篇 熒光原位雜交的染色體分析