細胞的培養方法
以前認為(wei) 紅、粒細胞、淋巴細胞、巨噬細胞等血細胞都屬終末分化細胞,很難在體(ti) 外培養(yang) 生長或僅(jin) 能短期培養(yang) 而不能傳(chuan) 代,近年來由於(yu) 淋巴細胞培養(yang) 基技術的發展,已有血細胞培養(yang) 成功的報道,正常血細胞在體(ti) 外培養(yang) 生長時間短,隻有白血病細胞,血友病細胞、淋巴瘤細胞可培養(yang) 成功並建立細胞係,但多半為(wei) EB病毒等致瘤病毒引起的轉化細胞,(EBNA檢查陽性),二甲基亞(ya) 碸(DMSO)處理也可誘導這些細胞分化發生逆轉,表現為(wei) 正常細胞。所建立的細胞係多半為(wei) 單核細胞係、B淋巴細胞係、T淋巴細胞係,隻在IL-2產(chan) 品問世後,T細胞才可在體(ti) 外建係、建株。
血細胞可從(cong) 外周血中用梯度液通過離心分層後分離獲得。也可從(cong) 脾髒、扁桃體(ti) 、淋巴結中用機械法切碎過篩分離獲得淋巴細胞,從(cong) 腹腔刺激後的衝(chong) 洗液中可獲得大量的單核-巨噬細胞,從(cong) 骨髓中可以獲得前提血細胞,並可培養(yang) 生長。加入生長因子或某些物質有利於(yu) 細胞純化並促進分化和生長繁殖,例如在淋巴細胞中加入IL-2(TCGF),可促進T細胞生長,建立T淋巴細胞係。在多發性骨髓瘤細胞(B細胞)培養(yang) 中,加B細胞生長因子,可建立B細胞係;加入IL-6(或正常淋巴細胞培養(yang) 48h的培養(yang) 上清中的IL6)可使B細胞在體(ti) 外培養(yang) ,建立了IL-6依賴的B9細胞係。在骨髓單個(ge) 核細胞培養(yang) 中加入二羥基3,可使單個(ge) 核細胞分化為(wei) 成骨細胞及破骨細胞。
人臍帶血來源方便,采集容易,對母嬰均無傷(shang) 害。近年來研究表明,臍帶血的血漿中富含許多高水平的造血活性物質,具有刺激和促進骨髓造血幹/祖細胞增殖、分化和再植能力的功能,是造血生長因子的重要來源。
臍帶血中富含類似於(yu) 骨髓的造血幹,其中CFU-G、BFU-E、CFU-GM近似或高於(yu) 正常成人骨髓和外周血中的造血幹/祖細胞,比骨髓更原始,具有很強的自我複製和再植能力。臍帶血中還含有類似於(yu) 骨髓的基質,對骨髓造血具有支持作用,在體(ti) 外培養(yang) 擴增中具有更大的增值能力,是造血幹細胞的理想來源,已被應用於(yu) Fanconi貧血、某些白血病和惡性腫瘤的治療,並容易獲得骨髓造血功能的重建。
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