1. 正式試驗時，應分別以陽性對照與(yu) 陰性對照控製試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應，可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
  2. 在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:
   (1) 固相載體(ti) 的選擇：許多物質可作為(wei) 固相載體(ti) ，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體(ti) ，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
  (2) 包被抗體(ti) (或抗原)的選擇：將抗體(ti) (或抗原)吸附在固相載體(ti) 表麵時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進行包被後，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對於(yu) 多數蛋白質來說通常為(wei) 1～10μg／ml。
  (3) 酶標記抗體(ti) 工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進行初步效價(jia) 的滴定(見酶標記抗體(ti) 部份)。然後再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體(ti) 分別為(wei) 不同的稀釋度)在正式實驗係統裏準確地滴定其工作濃度。
  (4) 酶的底物及供氫體(ti) 的選擇：對供氫體(ti) 的選擇要求是價(jia) 廉、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體(ti) (如OPD等)有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體(ti) ，如TMB和ABTS是目前較為(wei) 滿意的供氫體(ti) 。底物作用一段時間後，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鍾為(wei) 宜。底物使用液必須新鮮配製，尤其是H2O2在臨(lin) 用前加入。