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樣本因素對ELISA技術的質量影響

點擊次數:1173 更新時間:2016-07-08


標本幹擾因素包括內(nei) 源性幹擾因素和外源性幹擾因素,前者包括類風濕因子、補體(ti) 、異嗜性抗體(ti) 、自身抗體(ti) 、等,後者包括標本溶血、標本被細菌汙染、標本貯存時間過長、標本凝固不全、冷凍標本的反複凍融等。其中外源性幹擾因素是我們(men) 在檢測過程中可以避免也是必須避免的因素,而避免內(nei) 源性因素的幹擾則主要通過選擇合適的試劑盒。在臨(lin) 床中遇到少見的疑難病例時應當考慮到內(nei) 源性幹擾因素的存在。以下對外源性幹擾因素進行簡要說明:
1.標本溶血 要注意避免出現嚴(yan) 重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其具有類過氧化物的活性,因此,在以辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)為(wei) 標記酶的ELISA測定中,如果血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附於(yu) 固相,從(cong) 而與(yu) 後麵加入的底物反應顯色。

2.標本凝固不全 血液通常在采集後半小時後開始凝固,18~24h*凝固。如果在血液未凝固時即離心分離血清,則可因纖維蛋白原非特異吸附於(yu) 微孔而造成假陽性結果。為(wei) 了縮短標本處理時間,可以在離心前將血液標本置於(yu) 溫箱中溫育或者采用帶分離膠的或於(yu) 中加入適當的促凝劑以加速血清的分離。
3.標本被細菌汙染 標本的采集及血清分離要注意盡量避免細菌汙染。細菌菌體(ti) 中除可能含有內(nei) 源酶對測定產(chan) 生非特異性幹擾外,還可能對抗原抗體(ti) 等蛋白產(chan) 生分解作用。另外標本在保存中出現渾濁或絮狀物時,應離心沉澱後取上清檢測。
4.標本貯存時間過長 標本在低溫下保存時間過長,IgG可聚合成多聚體(ti) ,在間接法ELISA測定中會(hui) 導致本底加深、甚至出現假陽性結果。通常情況下血清標本可在2~8℃下保存l周,冷凍保存時間會(hui) 更長,但對於(yu) 抗體(ti) 或抗原含量低的標本而言,則可能會(hui) 因抗體(ti) 掉價(jia) 、抗原分解而出現假陰性結果。

5.冷凍保存標本避免反複凍融 標本的反複凍融會(hui) 因其所產(chan) 生的機械剪切力對標本中的蛋白等分子產(chan) 生破壞作用,使抗體(ti) 效價(jia) 跌落從(cong) 而引起假陰性結果,所以測抗體(ti) 的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝凍存。此外,標本在凍存時會(hui) 因蛋白質局部濃縮,分布不均,因此重新融解的標本必須混勻,但不要進行劇烈振蕩,反複顛倒即可。
 

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