抗生素的介紹
在細胞培養(yang) 中zui常用的抗生素是(常用濃度是25~100ui/ml)與(yu) (25~100μg/ml)。這兩(liang) 種抗生素常混合使用。在一些實驗室裏,它們(men) 常規加入所有的培養(yang) 基中。(10~100μg/ml)通常有廣譜抗菌效應,並具有溶液穩定性,故也被一些實驗室使用,特別是當有低水平的汙染存在時更是這樣。以上這些試劑對黴菌與(yu) 酵母菌的汙染均無效。
盡管很多實驗室在細胞係的培養(yang) 基中常規加入抗生素作繼代培養(yang) ,但仍建議不要在原代培養(yang) 中加入抗生素,其理由之一是獲得的細胞是無菌的,原代培養(yang) 時的細菌汙染很少發生。其次,盡管認為(wei) 抗生素對細胞代謝的影響可忽略,但避免使用它們(men) ,以免細胞生長環境的不穩定。zui重要的是要意識到培養(yang) 中主要汙染物的類型,它們(men) 通常暗示了問題的來源。
抗有絲(si) 分裂劑
某些DNA合成抑製劑對分裂細胞有毒,但對沒有DNA合成的細胞僅(jin) 有輕微影響。由於(yu) 神經元通常缺乏DNA合成能力,因此對抗有絲(si) 分裂劑沒有多大反應。這樣的試劑常常用於(yu) 神經元的培養(yang) ,以消除或減少非神經元群體(ti) 。若要殺死所有的非神經元細胞,可以先加入血清或生長因子來保證有高比例的非神經元細胞進行DNA合成,此時再加入抗有絲(si) 分裂劑。但是,某些細胞在它的細胞周期的某些時相時對抗有絲(si) 分裂劑是不敏感的。不過,可以重複的將抗有絲(si) 分裂劑使用於(yu) 增殖的細胞群體(ti) 。在CNS神經元的培養(yang) 中抗有絲(si) 分裂劑常常在星形細胞形成單層後加入,此時,星形細胞由於(yu) 接觸抑製而終止了DNA的合成(即細胞停止增殖),它們(men) 不會(hui) 因抗有絲(si) 分裂劑的加入而死亡。原代培養(yang) 中用這種方法阻止成纖維細胞的過度增殖是十分必要的。有兩(liang) 種抗有絲(si) 分裂劑常用於(yu) 神經元的培養(yang) : Fluorodexyuridine,是胸苷合成酶抑製劑,一般使用濃度為(wei) ~10μM。尿苷(10μM)也常使用,可阻止不分裂細胞的RNA合成。另外,阿糖胞苷也常被使用,其使用濃度為(wei) 5~50μM。使用任何一種抗有絲(si) 分裂劑,都必須考慮它的神經原毒性,應該確定zui低效應的使用濃度。阿糖胞苷在很低的濃度下,也會(hui) 對某些種類的神經元有毒性,可以造成特定神經原的死亡。其他的抗有絲(si) 分裂劑尚未表現出這種毒性。
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