細胞爬片的免疫組化染色的操作步驟
1. 取出細胞爬片，迅速置入冷丙酮固定 20~30 分鍾
2. 蒸餾水浸泡 5 分鍾，2 次。
3. 打孔液浸泡 5 分鍾。
4. 蒸餾水浸泡 5 分鍾，2 次。
注：第 3、4 步僅(jin) 用於(yu) 檢測細胞內(nei) 抗原，檢測細胞膜抗原時不用。
5. 正常血清封閉：從(cong) 染片缸中取出切片，擦淨切片背麵水分及切片正麵組織周圍的水分 （保持組織呈濕潤狀態,）滴加正常山羊或兔血清 （與(yu) 第二抗 體(ti) 同源動物血清）處理，37℃，15 分鍾。
附：正常血清配製 （ 或按試劑盒規定的濃度配製）：按 1:20比例，用 PBS 配製，每張切片需要量按 50μ+5μl （10%拋灑量） 計算。
6. 滴加*抗體(ti) ：用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加*抗體(ti) ，37℃ 2 小時（也可置於(yu) 4℃冰箱過夜） 。
7. PBS：5 分鍾，2 次（置於(yu) 搖床） 。
8. 滴加化的二抗，37℃，40 分鍾。
9. PBS：5 分鍾，2 次（置於(yu) 搖床） 。
10. 滴加三抗 （SAB 複合物） ，37℃，40 分鍾。
11. PBS：5 分鍾，2 次（置於(yu) 搖床） 。
12. DAB 顯色，鏡下觀察，適時終止（自來水衝(chong) 終止） 。
附：DAB 的配製① 儲(chu) 備液（DAB 25mg/ml）的配製：DAB 250mg + PBS 10ml，待*溶解後分裝成 1ml，100μl，50μl ，20μl 等，-20℃，凍存。② 工作液：DAB 儲(chu) 備液 20μl + PBS 1000μl + 3% H2O2 5μl
13. 自來水（細水）充分衝(chong) 洗。
14. 蘇木素複染，室溫，30 秒，自來水衝(chong) 洗。
15. 自來水衝(chong) 洗返藍，15 分鍾。
16. 梯度酒精脫水：80%，2 分鍾 95%，2 分鍾 100%，2 次，5 分鍾。
17. 二甲苯透明：I ，II （二甲苯）各 5 分鍾
18. 封片：加拿大樹膠（或中性樹膠）封片。