紙層析法的基本原理及操作方法

紙層析法是用濾紙作為(wei) 惰性支持物的分配層析法。

層析溶劑由有機溶劑和水組成。

物質被分離後在紙層析圖譜上的位置是用Rf 值(比移)來表示的：

R=原點到層析點中心的距離

原點到溶劑前沿的距離

在一定的條件下某種物質的Rf 值是常數。Rf 值的大小與(yu) 物質的結構、性質、溶劑係統、層析濾紙的質量和層析溫度等因素有關(guan) 。本實驗利用紙層析法分離氨基酸。

器材

1、層析缸① 2、毛細管3、噴霧器4、培養(yang) 皿

5、層析濾紙(新華一號)

試劑

1、擴展劑

是4 份水飽和的正丁醇和1 份醋酸的混合物。將20mL 正丁醇和5mL 冰醋酸放入分液漏鬥中，與(yu) 15mL 水混合，充分振蕩，靜置後分層，放出下層水層。取漏鬥內(nei) 的擴展劑約5mL 置於(yu) 小燒杯中做平衡溶劑，其餘(yu) 的倒入培養(yang) 皿中備用.

2、氨基酸溶液0.5%的賴氨酸、、、苯、溶液及它們(men) 的混合液(各組份濃度均為(wei) 0.5%)。各5mL

3、顯色劑50~100mL

0.1%水合茚三銅正丁醇容液。

操作

1、將盛有平衡溶劑的小燒杯置於(yu) 密閉的層析缸中。

2、取層析濾紙(長22cm、寬14cm)一張。在紙的一端距邊緣2~3cm處用鉛筆劃一條直線，在此直線上第間隔2cm 作一記號如右圖。

3、點樣用毛細管將各種氨基酸樣品分別點在這6 個(ge) 位置上，幹後再點一次。每點在紙上擴散的直徑zui大不超過3mm。

4、擴展用線將濾紙縫成筒狀，紙的兩(liang) 邊不能接觸。將盛有約20mL擴展劑的培養(yang) 皿建迅速置於(yu) 密閉的層析缸中，並將濾紙直立於(yu) 培養(yang) 皿中(點樣的一端在下，擴展劑的液麵需你於(yu) 點樣線1cm)。待溶劑上升15~20cm 時即取出濾紙，自然幹燥或用吹風機熱風吹幹。

5、顯色用噴霧器均勻噴上0.1%茚三酮正丁醇溶液，然後置烘箱中烘烤5 分鍾(100℃)或用熱風吹幹即可顯出各層析斑點。

6、計算各種氨基酸的Rf 值。