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巨噬細胞炎性蛋白2星空体育官网中国免疫吸附劑

點擊次數:1099 更新時間:2017-05-09

已包被抗原或抗體(ti) 的固相載體(ti) 在低溫(2~8℃)幹燥的條件下一般可保存6個(ge) 月以上。有些不完整的試盒,僅(jin) 供應包被用抗原或抗體(ti) ,檢測人員需自行包被。以下簡述固相載體(ti) 和包被過程。 
固相載體(ti) 在Elisa測定過程中作為(wei) 吸附劑和容器,不參與(yu) 化學反應。可作Elisa中載體(ti) 的材料很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的性能,抗體(ti) 或蛋白質抗原吸附其上後仍保留原來的免疫學活性,加之它的價(jia) 格低廉,所以被普遍采用。聚苯乙烯為(wei) 塑料,可製成各種形式。 
Elisa載體(ti) 的形狀主要有三種:微量滴定板、小珠和小試管。以微量滴定板zui為(wei) 常用,於(yu) EILSA的產(chan) 品稱為(wei) Elisa板,上標準的微量滴定板為(wei) 8×12的96孔式。為(wei) 便於(yu) 作少量標本的檢測,有製成8聯孔條或12聯孔條的,放入座架後,大小與(yu) 標準ELISA板相同。ELISA板的特點是可以同時進行大量標本的檢測,並可在特製的比色計上迅速讀出結果。現在已有多種自動化儀(yi) 器用於(yu) 微量滴定板型的ELISA檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操作的標準化極為(wei) 有利。聚苯乙烯經射線照射後,其吸附性能特別是對免疫球蛋白的吸附性能增加,應用於(yu) 雙抗體(ti) 夾心法可使固相上抗體(ti) 量增多,但用於(yu) 間接法測抗體(ti) 時空白值較大。 
良好的ELISA板應該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間、同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由於(yu) 原料的不同和製作工藝的差別,各種產(chan) 品的質量差異很大,因此,每一批號的ELISA板在使用前須事先檢查其性能。常用的檢查方法為(wei) :以一定濃度的人IgG(一般為(wei) 10ng/ml)包被ELISA板各孔,洗滌後每孔內(nei) 加入適當稀釋度的酶標抗人IgG抗體(ti) ,保溫後洗滌,加底物顯色,終止酶反應後,分別測每孔溶液的吸光度。控製反應條件,使各孔讀數在吸光度0.8左右。計算全部讀數的平均值。所有單個(ge) 讀數與(yu) 全部讀數的均數之差,應小於(yu) 10%。 
與(yu) 聚苯乙烯類似的塑料是聚氯乙烯。作為(wei) ELISA固相載體(ti) ,聚氯乙烯的特點為(wei) 質軟板薄,可剪割,價(jia) 廉,但光潔度不如聚苯乙烯板,孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯對蛋白質的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高。 
為(wei) 比較不同固相在某一ELISA測定中的優(you) 劣,可應用如下的試驗:用其他免疫學測定方法選出一個(ge) 典型的陽性標本和陰性標本,將它們(men) 進行一係列稀釋後,在不同的固相載體(ti) 上按預定的ELISA操作步驟進行測定,然後比較結果。在哪一種載體(ti) 上陽性結果與(yu) 陰性結果差別zui大,這種載體(ti) 就是這一ELISA測定項目的zui合適的固相載體(ti) 。 
在ELISA中,用作固相載體(ti) 的小珠一般為(wei) 直徑0.6cm的圓珠,表麵經磨砂處理後吸附麵積大大增加。ELISA板孔的吸附麵積約為(wei) 200mm2,小珠均為(wei) 1000mm2,將近ELISA板孔的5倍。吸附麵積的增大即意味著固相抗原或抗體(ti) 量的增加。再者,球型小珠的表麵弧度更有利於(yu) 吸附的抗原決(jue) 定簇或抗體(ti) 結合位點的暴露麵處於(yu) 反應狀態,因此珠式ELISA的反應往往更為(wei) 靈敏。小珠的另一特點是更易於(yu) 使洗滌*,使用特殊的洗滌器,使小珠在洗滌過程中滾動淋洗,其洗滌效果遠較板孔的浸泡式為(wei) 好。但由於(yu) 磨砂工藝的難度較大,小珠的均一性較差。小試管作為(wei) 固相載體(ti) 也有較大的吸附表麵,而且標本的反應量也相應增加。板式及珠式ELISA的標本量一般為(wei) 00-200ul,而小試管可根據需要加大反應體(ti) 積,標本反應量的增加有助於(yu) 試驗敏感性的提高。小試管還可以當作比色杯,zui後直接放入分光光度計中比色。 
 

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