實驗操作程序簡述

  1. 準備試劑，樣品和標準品；
  2. 加入準備好的樣品和標準品，37℃反應30分鍾；
  3. 洗板5次，加入酶標試劑，37℃反應30分鍾；
  4. 洗板5次，加入顯色液A、B，37℃反應10分鍾；
  5. 加入終止液；
  6. 15分鍾之內(nei) 度OD值；
  7. 計算。
競爭(zheng) 法測抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩(liang) 個(ge) 以上的位點，因此不能用雙抗體(ti) 夾心法進行測定，可以采用競爭(zheng) 法模式。其原理是標本中的抗原和一定量的酶標抗原競爭(zheng) 與(yu) 固相抗體(ti) 結合。標本中抗原量含量愈多，結合在固相上的酶標抗原愈少，zui後的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。
包被的條件
包被用抗原或抗體(ti) 的濃度，包被的溫度和時間，包被液的pH等應根據試驗的特點和材料的性質而選定。抗體(ti) 和蛋白質抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩衝(chong) 液作為(wei) 稀釋液，也有用pH7.2的磷酸鹽緩衝(chong) 液及pH7~8的Tris-HCL緩衝(chong) 液作為(wei) 稀釋液的。通常在ELISA板孔中加入包被液後，在4-8℃冰箱中放置放置一個(ge) 晚上，37℃中保溫2小時被認為(wei) 具有同等的包被效果。包被的zui適當濃度隨載體(ti) 和包被物的性質可有很大的變化，每批材料需通過實驗與(yu) 酶結合物的濃度協調選定。一般蛋白質的包被濃度為(wei) 100ng/ml-20ug/ml。
抗原和抗體(ti)  
製備結合物時所用抗體(ti) 一般 均為(wei) 純度較高的IgG，以免在與(yu) 酶聯結時其他雜蛋白的幹擾。用親(qin) 和層析純的抗體(ti) ，這樣全部酶結合物均具有特異的免疫活性，可以在高稀釋度進行反應，實驗結果本底淺淡。如用F(ab')2進行標記，則更可避免標本中RF的幹擾。在ELISA試劑盒現貨中用酶標抗原的模式不多，總的要求是抗原必須是高純度的。