樣本的收集操作不當影響17羥孕酮星空体育官网中国實驗結果
以其靈敏度較高、特異性好的特點已廣泛用於(yu) 科研實驗及臨(lin) 床,越來越多科研單位選擇用ELISA實驗方法完成研究課題。的試劑、好的儀(yi) 器和正確的操作是保證ELISA試劑盒檢測結果準確可靠的必要條件,但樣本的收集及保存操作不當也會(hui) 影響ELISA實驗結果。樣本的收集跟保存聽上去貌似很簡單,但不乏有許多科研工作者因為(wei) 樣本的收集跟保存沒做好而影響實驗結果。
下麵針對樣本收集及保存江萊生物提幾點建議:
1.嚴(yan) 重溶血,以HRP為(wei) 標記的ELISA測定中,殘留在孔內(nei) 的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽性;
2.混有紅細胞的血清易沉澱或附著在聚乙烯孔內(nei) 不易洗淨;如有細菌汙染,菌體(ti) 中可能含有內(nei) 源性HRP,也會(hui) 產(chan) 生假陽性反應:
3.標本凝固不全,有時為(wei) 了爭(zheng) 取時間快速檢測,常在血液還未開始凝固時即強行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;
4.采血試管洗滌不*、反複使用易交叉汙染:塑料試管能吸附抗原物質,樣本久置在塑料管內(nei) 會(hui) 使樣本內(nei) 抗原含量下降造成假陰性。
血清標本宜在新鮮時檢測,嚴(yan) 重溶血標本禁用。一般說來,在5天內(nei) 測定的血清標本可放置於(yu) 4℃,標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。凍結血清融解後,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混勻並避免產(chan) 生氣泡。混濁或有沉澱的血清標本應先離心或過濾,澄清後再檢測。反複凍融會(hui) 使抗體(ti) 效價(jia) 跌落,所以測抗體(ti) 的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存;使用一次性玻璃試管或真空管;並使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會(hui) 增加OD值,可能與(yu) 高濃度肝素具有強大的負電荷能吸附酶標記物不易洗脫有關(guan) ;EDTA、酶抑製劑(如NaN3)可抑製ELISA係統中辣根過氧化物酶活性;血液標本采集後必須使其充分凝固後再分離血清,或標本采集時用帶分離膠的或於(yu) 中加入適當的促凝劑。
被檢血清或血漿標本,可用含保護性封阻劑(吐溫-20)或稱濕潤劑的緩衝(chong) 液來稀釋。也可加入一些蛋白質,如1%牛血清白蛋白等來稀釋。然後再加到已經用抗原或抗體(ti) 包被的固相載體(ti) 中進行孵育。此種被試標本可作一係列稀釋度測定,也可用一個(ge) 稀釋度測定。對於(yu) 作某一個(ge) 傳(chuan) 染病的診斷來說,先用一係列稀釋度作一批標本測定,求出對診斷有意義(yi) 的一個(ge) 稀釋度(即測定劑量反應曲線),然後用一個(ge) 稀釋測定即可。zui適稀釋度和孵育時間均需從(cong) 實踐中摸索出來,對一般病原微生物所引起的傳(chuan) 染病的血清學診斷,以1:200稀釋度測定比較適當,而試驗標本的(即含抗體(ti) )作用時間一般為(wei) 室溫或37℃ 1-2小時。但現在對有些標本(如流腦抗原)測定時,僅(jin) 用37℃ 5分鍾。對單克隆抗體(ti) 檢測也可縮短作用時間。
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