試驗是一種敏感性高，特異性強，重複性好的實驗診斷方法。由於(yu) 其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中，在今天的文章中，將為(wei) 大家介紹如何用ELISA方法去檢測ABA的含量！
    先將ABA蛋白質複合物與(yu) 固相載體(ti) (聚苯乙烯微量滴定板)結合,然後將待測的ABA(樣品或標準品)和兔抗ABA抗體(ti) 加入微量滴定板的孔中,進行競爭(zheng) 反應,接著棄去上清液,洗滌固相表麵,加入酶標二抗使其與(yu) 結合在固相ABA上的抗體(ti) 反應,zui後去除多餘(yu) 的未反應的酶標二抗,測定與(yu) 固相結合的酶活性,酶活性和待測ABA含量呈負函數關(guan) 係,即固相ABA結合的抗體(ti) 與(yu) 酶標二抗量(OD或B%)隨待測ABA含量增加而減少,以一係列已知濃度的ABA的OD值製圖而獲得標準競爭(zheng) 性抑製曲線,對於(yu) 未知樣品B,隻要在同樣條件下測定反應後的OD值,就可以從(cong) 標準曲線上查到ABA的量。
測定方法 
1.包被：在微量滴定板內(nei) 準確加入100μLABA包被液，37℃濕盒過夜。 
2.標樣稀釋?：取8支試管每管加150μLDB，*管中加入50μL（2000ng/50μL）標準液，充分渦旋後，取50μL至第二號管中，同樣渦旋後，取50μL到第三管；依次稀釋到第六管，稀釋後的標準ABA依次為(wei) 1000ng、500ng、250ng、125ng、62.5ng、31.25ng、15.625ng、7.8125ng/50μL。 
3. 洗板：從(cong) 37℃濕盒中取出滴定板，恢複到室溫後，棄去包被液，用WB（洗滌緩衝(chong) 液）洗滌三次，甩幹（吸水紙）。 
4.加樣：1～8孔對應加入ABA標樣50μL，10號孔相應加入zui濃ABA標樣，9號孔加50μLDB，三排重複；然後每孔加50μL抗體(ti) ，37℃ 45分鍾。 
5.洗板： 
6.加酶標二抗：每孔加100μL，37℃反應1小時。 
7.洗板： 
8.顯色：各孔加10μLOPD顯色液，37℃ 20分鍾。 
9.終止反應：各孔加50μL 6NH2SO4。 
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