測定小分子量物質常用競爭(zheng) 法，其標準曲線中吸光度與(yu) 受檢物質的濃度呈負相關(guan) 。標準曲線的形狀因。在實驗條件（包括試劑）較難保證恒定的情況下，這種判斷法較為(wei) 合適。在得出標本（ S）和陰性對照（N）的A值後，計算S/N值。也有寫(xie) 作P/N的，這裏的P不代表陽性(positive)，而是病人（pati ent）的縮寫(xie) ，不應誤解。ELISA試劑盒為(wei) 避免混淆，更宜用S/N表示。在早期的間接法ELISA中，有些作者定出S/N為(wei) 陽性標準，現多為(wei) 各種測定所沿用。

     實際上每一測定係統應該用實驗求出各自的S/N的閾值。更應注意的是，N所代表的陰性對照是不含受檢物質的人血清。有的試劑盒中所設陰性對照為(wei) 不含蛋白質或蛋白質含量較底的緩衝(chong) 液，以致反應後產(chan) 生的本底可能較正常人血清的本底低得多。ELISA試劑盒陰性對照的組成應為(wei) 不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結果時，更宜用顯色深於(yu) 陰性對照作為(wei) 標本陽性的指標。

     因此，這類試劑盒規，如N<0.05<>（或其他數值），則按0.05計算，否則將出現假陽性結果。此本底的深淺因試劑的組成和實驗的條件不同而異，因此實驗中必須加測陰性對照。每批測試均須用一係列不同濃度的參考標準品在相同的條件下製作標準曲線。測定大分子量物質的夾心法ELISA試劑盒，標準曲線的範圍一般較寬，曲線zui高點的吸光度可接近2.0，繪製時常用半對數紙，以檢測物的濃度為(wei) 橫坐標，以吸光度為(wei) 縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨於(yu) 平坦，較呈直線的部分是的檢測區域。