大鼠鉀離子通道2（PIC2）試劑盒（ELISA）

實驗原理

試劑盒采用雙抗體(ti) 一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被大鼠鉀離子通道2（PIC2）捕獲抗體(ti) 的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體(ti) ，經過溫育並*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠鉀離子通道2（PIC2）呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣本處理及要求

1.  血清：將收集於(yu) 血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然後1000×g離心20 分鍾，取上清即可，或將上清置於(yu) -20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。
2.  血漿：用EDTA或肝素作為(wei) 抗凝劑采集標本，並將標本在采集後的30分鍾內(nei) 於(yu) 2-8℃ 1000×g離心15分鍾，取上清即可檢測，或將上清置於(yu) -20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。
3.  組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)衝(chong) 洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會(hui) 影響測量結果），稱重後將碎。將剪碎的組織與(yu) 對應體(ti) 積的PBS（一般按1:9的重量體(ti) 積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體(ti) 體(ti) 積可根據實驗需要適當調整，並做好記錄。在PBS中加入蛋白酶抑製劑）加入玻璃勻漿器中，於(yu) 冰上充分研磨。為(wei) 了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反複凍融。後將勻漿液於(yu) 5000×g離心5~10分鍾，取上清檢測。

4.  細胞培養(yang) 物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鍾，取上清即可檢測，或將上清置於(yu) -20℃或-80℃保存，但應避免反複凍融。

注：標本溶血會(hui) 影響後檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標儀(yi) （450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

無

標準品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

無

樣本稀釋液

6mL

3mL

無

檢測抗體(ti) -HRP

10mL

5mL

無

20×洗滌緩衝(chong) 液

25mL

15mL

按說明書(shu) 進行稀釋

底物A

6mL

3mL

無

底物B

6mL

3mL

無

終止液

6mL

3mL

無

封板膜

2張

2張

無

說明書(shu)

1份

1份

無

自封袋

1個(ge)

1個(ge)

無

備注：

1.  標準品濃度依次為(wei) ：3200、1600、800、400、200、100 pg/mL

2.  經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測範圍內(nei) ，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋後再進行實驗。

注意事項

1. 嚴(yan) 格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用後立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸幹孔內(nei) 液體(ti) 。溫育過程中不要讓微孔幹燥掉。

3. 消除板底殘留的液體(ti) 和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉汙染以免造成錯誤結果。

6. 在儲(chu) 存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫後再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體(ti) 。任何漂白成分都會(hui) 破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chan) 品。

10. 如果可能傳(chuan) 播疾病，所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑準備

試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡後方可使用。

20×洗滌緩衝(chong) 液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩衝(chong) 液加19份蒸餾水。