HRP的製備方法

1).水提取：稱取5kg用水衝(chong) 刷幹淨的鮮辣根(辣根皮中亦含有豐(feng) 富的HRP)，用菜刀切成小碎塊，在絞肉機中絞碎1～2次。碎渣漿用1倍體(ti) 積的水低溫下攪拌提取過一夜(亦可采用高速抽提法)。次日用甩幹機(或離心機)甩幹，收集濾液，碎渣再用1/4倍體(ti) 積水浸泡提取1次，合並2次濾液，測得總體(ti) 積。

2).硫酸銨分級分離：在不斷攪拌下，每1000mL濾液中慢慢加入226g硫酸銨粉末(相當於(yu) 0.40飽和度，0℃)，大約在1~2h內(nei) 加完，置冷室中放置過一夜。次日將上清液小心地用虹吸管移出，下麵混濁液以3 000r/min離心15min，棄沉澱，合並上清液。再按每1000mL上清液加258g硫酸銨粉末(0.8飽和度)隨加隨攪拌，當硫酸銨全部溶解後，置冷室過一夜。次日，虹吸出上清液，沉澱部分在冰凍離心機中以13000r/min離心20min，棄去上清液，收集沉澱。將沉澱懸浮於(yu) 100~150mL蒸餾水中(加水量要使沉澱全部溶解為(wei) 止)，分裝於(yu) 透析袋內(nei) ，放在流動自來水中進行透析1～2天，直到硫酸銨透析完畢為(wei) 止(可用5%乙酸鋇溶液或奈氏試劑進行檢查)。然後改換成用蒸餾水透析，中間更換2~3次，用0.1mol/L溶液檢查透析外液無氯離子為(wei) 止。將透析液合並，在冰凍離心機中以4 000r/min離心15min，棄去沉澱，量上清液的體(ti) 積。