相關蛋白1(FGL1)檢測ELISA試劑盒檢測原理:
相關(guan) 蛋白1(FGL1)檢測檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體(ti) 夾心法:抗相關(guan) 蛋白1(FGL1)單抗包被於(yu) 酶標板上,標本和標準品中的纖維蛋白原相關(guan) 蛋白1(FGL1)會(hui) 與(yu) 單抗結合,遊離的成份被洗去。加入酶標抗體(ti) ,抗相關(guan) 蛋白1(FGL1)抗體(ti) 與(yu) 結合在單抗上的相關(guan) 蛋白1(FGL1)結合而形成免疫複合物,遊離的成分被洗去。加入顯色底物,若反應孔中有纖維蛋白原相關(guan) 蛋白1(FGL1),辣根過氧化物酶會(hui) 使無色的顯色劑現藍色,加終止液變黃。在450nm處測OD值,纖維蛋白原相關(guan) 蛋白1(FGL1)濃度與(yu) OD450值之間呈正比,可通過繪製標準曲線求出標本中的纖維蛋白原相關(guan) 蛋白1(FGL1)濃度。
相關(guan) 蛋白1(FGL1)檢測試劑盒樣品收集:
1. 血清:全血樣品於(yu) 室溫放置2小時或4℃過夜後於(yu) 1000×g離心20分鍾,取上清即可檢測,收集血液的試管應為(wei) 一次性的無熱原,無內(nei) 毒素試管。
2. 血漿:抗凝劑使用EDTA-Na2,樣品采集後30分鍾內(nei) 於(yu) 1000×g離心15分鍾,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂樣品。
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)衝(chong) 洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會(hui)
影響測量結果),稱重後將碎。將剪碎的組織與(yu) 對應體(ti) 積的PBS(一般按1:9的重量體(ti) 積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體(ti) 體(ti) 積可根據實驗需要適當調整,並做好記錄。在PBS中加入蛋白酶抑製劑)加入玻璃勻漿器中,於(yu) 冰上充分研磨。為(wei) 了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反複凍融。zui後將勻漿液於(yu) 5000×g離心5~10分鍾,取上清檢測。
4. 細胞培養(yang) 上清:取細胞培養(yang) 上清於(yu) 1000×g離心20分鍾,除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。
5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鍾,取上清即可檢測
6. 樣品應清澈透明,懸浮物應離心去除。
7. 樣品收集後若在1周內(nei) 進行檢測的可保存於(yu) 4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存於(yu) -20℃(1個(ge) 月內(nei) 檢測),或-80℃(6個(ge) 月內(nei) 檢測),避免反複凍融。
8. 如果您的樣品中檢測物濃度高於(yu) 標準品zui高值,請根據實際情況,做適當倍數稀釋(建議先做預實驗,以確定稀釋倍數)。
試驗所需自備物品:
1. 酶標儀(yi) (450nm波長濾光片)
2. 高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL
3. 37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙
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