產(chan) 生各種條帶的常見原因

1.產(chan) 生非特異性條帶

1)用RT陰性對照檢測是否被基因組DNA汙染。如果RT陰性對照的PCR結果也顯示同樣條帶，則需要用DNase I重新處理樣品。

2)在PCR反應中，非特異的起始擴增將導致產(chan) 生非特異性結果。在低於(yu) 引物Tm 2至5℃的溫度下進行退火，降低鎂離子或是目的DNA的量將減少非特異性結果的產(chan) 生。

3)由於(yu) mRNA剪切方式的不同，根據選擇引物的不同將導致產(chan) 生不同的RT-PCR結果。

2. 產(chan) 生彌散（smear）條帶

1)在PCR反應體(ti) 係中di一鏈產(chan) 物的含量過高

2)減少引物的用量

3)優(you) 化PCR反應條件/減少PCR的循環次數

4)在用DNase處理被DNA汙染的RNA樣品時，其產(chan) 生的寡核苷酸片段會(hui) 產(chan) 生非特異性擴增，一般會(hui) 顯示為(wei) 彌散背景。

3. 產(chan) 生大分子量的彌散條帶

1)大多數情況下是由於(yu) 退火溫度過低而導致的非特異性的起始及延伸產(chan) 生的

2)對於(yu) 長片段的PCR，建議將反應體(ti) 係中cDNA的濃度稀釋至1:10（或1:100-1:200）