倉鼠Ca-ATP酶試劑盒酶聯免疫吸附試驗法操作步驟
(酶聯免疫吸附試驗法)操作步驟:
1. 從(cong) 室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條,剩餘(yu) 板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體(ti) 100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體(ti) ,吸水紙上拍幹,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍幹,如此重複洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nei) ,在450nm波長處測定各孔的OD值。
[實驗結果計算]
以所測標準品的OD值為(wei) 橫坐標,標準品的濃度值為(wei) 縱坐標,在坐標紙上或用相關(guan) 軟件繪製標準曲線,並得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
[試劑盒性能]
1. 檢測範圍:0.25 μmol/mL – 8 μmol/mL。
2. 靈敏度:zui低檢測濃度小於(yu) 0.1 μmol/mL。
3. 特異性:不與(yu) 其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重複性:板內(nei) 變異係數小於(yu) 10% ,板間變異係數小於(yu) 15% 。
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