小鼠心鈉肽(ANP)elisa酶聯免疫試劑盒競爭法自視判斷
競爭(zheng) 法ELISA不易用自視判斷結果,因肉眼很難辨別弱陽性反應與(yu) 陰性對照的顯色差異,一般均用比色計測定,讀出S、P和N的吸光值。計算方法主要也有兩(liang) 種,即陽性判定值法和抑製率法。
在競爭(zheng) 法中,陰性孔呈色深於(yu) 陽性孔。陰性呈色的強度取決(jue) 於(yu) 反應中酶結合物的濃度和加入競爭(zheng) 抑製物的量,一般調節陰性對照的吸光度在1.0-1.5之間,此時反應zui為(wei) 敏感。
a. 陽性判定值法
與(yu) 間接法和夾心法中的陽性判定值法基本相同,ELISA試劑盒但在計算公式中引入陽性對照A值,現舉(ju) 某種檢測抗HBc的試劑盒為(wei) 例。試劑盒中的陰性對照為(wei) 不含抗HBc的複鈣人血漿,陽性對照中抗HBc含量為(wei) 125±100u/ml。每次試驗設2個(ge) 陽性對照和3個(ge) 陰性對照。測得A值後,先計算陰性對照A值的平均值(NCX)和陽性對照A值的平均數(PCX),兩(liang) 個(ge) 平均數的差(N-P)必須大於(yu) 一個(ge) 特定的數值(例如0.300),試驗才有效。3個(ge) 陰性對照A值均應小於(yu) 2.000,而且應≥0.5×NCX並≤1.5×NCX,如其中之一超出此範圍,則棄去,而以另2個(ge) 陰性對照重新計算×NCX;如有2個(ge) 陰性對照A超出以上範圍,則該次實驗無效。陽性判定值按下式計算:陰性判定值=0.4×NCX+0.6×PCX,標本A值≤陽性判定值的反應為(wei) 陽性,A>陽性判定值的反應為(wei) 陰性。
b. 抑製率法
抑製率表示標本在競爭(zheng) 結合中標本對陰性反應顯色的抑製程度,按下式計算:
抑製率(%)= ELISA試劑盒(陰性對照A值-標本A值)×100/陰性對照A值,一般規定抑製率≥50%為(wei) 陽性,<50%為(wei) 陰性。
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