檢測未知抗體(ti) 的間接法:
1.用包被緩衝(chong) 液將已知抗原稀釋至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。
 
2.次日洗滌3次。
 
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體(ti) )0.1ml於(yu) 上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)於(yu) 反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(ti) (抗抗體(ti) )0.1ml，37℃孵育30-60分鍾，洗滌,一遍用DDW洗滌。
 
4. 加底物液顯色：於(yu) 各反應孔中加入臨(lin) 時配製的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分鍾。
 
5. 終止反應：於(yu) 各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
 
6. 結果判定：可於(yu) 白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內(nei) 顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為(wei) 無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測O·D值：在ELISA檢測儀(yi) 上，於(yu) 450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零後測各孔O·D值，若大於(yu) 規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為(wei) 陽性。

競爭(zheng) 法的簡要操作步驟：
1）先加入特異性抗原，使抗原固定結合於(yu) 載體(ti) 表麵；
2）加入梯度濃度比例的待測樣品與(yu) 酶標抗體(ti) 混合物，並做隻加酶標抗體(ti) 的對照組；
3）加入酶促反應底物，發生顯色反應，對比實驗組及對照組的顯色差異，計算未知抗體(ti) 的量。