細胞表麵免疫印跡抗體的鑒定步驟
的鑒定:
1)抗體(ti) 的效價(jia) 鑒定:不管是用於(yu) 診斷還是用於(yu) 治療,製備抗體(ti) 的目的都是要求較高效價(jia) 。不同的抗原製備的抗體(ti) ,要求的效價(jia) 不一。鑒定效價(jia) 的方法很多,包括有試管凝集反應,瓊脂擴散試驗,酶聯免疫吸附試驗等。常用的抗原所製備的抗體(ti) 一般都有約成的鑒定效價(jia) 的方法,以資比較。如製備抗抗體(ti) 的效價(jia) ,一般就采用瓊脂擴散試驗來鑒定。
2)抗體(ti) 的特異性鑒定:抗體(ti) 的特異性是指與(yu) 相應抗原或近似抗原物質的識別能力。抗體(ti) 的特異性高,它的識別能力就強。衡量特異性通常以交叉反應率來表示。交叉反應率可用競爭(zheng) 抑製試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭(zheng) 抑製曲線,計算各自的結合率,求出各自在IC50時的濃度,並按公式計算交叉反應率。
如果所用抗原濃度IC50濃度為(wei) pg/管,而一些近似抗原物質的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與(yu) 其他抗原物質的交叉反應率近似為(wei) 0,即該血清的特異性較好。
3)抗體(ti) 親(qin) 和力:是指抗體(ti) 和抗原結合的牢固程度。親(qin) 和力的高低是由抗原分子的大小,抗體(ti) 分子的結合位點與(yu) 抗原決(jue) 定簇之間立體(ti) 構型的合適度決(jue) 定的。有助於(yu) 維持抗原抗體(ti) 複合物穩定的分子間力有氫鍵,疏水鍵,側(ce) 鏈相反電荷基因的庫侖(lun) 力,範德華力和空間斥力。親(qin) 和力常以親(qin) 和常數K表示,K的單位是L/mol。抗體(ti) 親(qin) 和力的測定對抗體(ti) 的篩選,確定抗體(ti) 的用途,驗證抗體(ti) 的均一性等均有重要意義(yi) 。
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