大鼠γ-氨基丁酸(GABA)ELISA Kit操作步驟
操作步驟:
1)使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體(ti) 產(chan) 生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產(chan) 生加樣上的誤差。
2)根據待測樣品數量加上標準品的數量決(jue) 定所需的板條數。每個(ge) 標準品和空白孔建議做複孔。每個(ge) 樣品根據自己的數量來定,能使用複孔的盡量做複孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋後加入50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。
3)加入稀釋好後的標準品50ul於(yu) 反應孔、加入待測樣品50ul於(yu) 反應孔內(nei) 。立即加入50ul的生物su標記的抗體(ti) 。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4)甩去孔內(nei) 液體(ti) ,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
5)每孔加入80ul的親(qin) 和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鍾。
6)甩去孔內(nei) 液體(ti) ,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍幹。重複此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。
7)每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鍾。避免光照。
8)取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液後應立即測定結果。
9)在450nm波長處測定各孔的OD值。
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