原理簡述如下:

1. TaqMan熒光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個(ge) 特異性的熒光探針,該探針為(wei) 一寡核苷酸,兩(liang) 端分別標記一個(ge) 報告熒光基團和一個(ge) 淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從(cong) 而熒光監測係統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個(ge) 熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與(yu) PCR產(chan) 物形成*同步。而新型TaqMan-MGB探針使該技術既可進行基因定量分析,又可分析基因突變(SNP),有望成為(wei) 基因診斷和個(ge) 體(ti) 化用藥分析的*技術平台。

2. SYBR熒光染料:在PCR反應體(ti) 係中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈後,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(hui) 發射任何熒光信號,從(cong) 而保證熒光信號的增加與(yu) PCR產(chan) 物的增加*同步。SYBR僅(jin) 與(yu) 雙鏈DNA進行結合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。

3. 分子信標:是一種在5和3末端自身形成一個(ge) 8個(ge) 堿基左右的發夾結構的莖環雙標記寡核苷酸探針,兩(liang) 端的核酸序列互補配對,導致熒光基團與(yu) 淬滅基團緊緊靠近,不會(hui) 產(chan) 生熒光。PCR產(chan) 物生成後,退火過程中,分子信標中間部分與(yu) 特定DNA序列配對,熒光基因與(yu) 淬滅基因分離產(chan) 生熒光 。

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