固相載體(ti) 采用免疫酶技術

　　免疫酶技術的主要試劑為(wei) 固相的抗原或抗體(ti) 、酶標記的抗原或抗體(ti) 和與(yu) 標記酶直接關(guan) 聯的酶反應底物。可作固相載體(ti) 的物質很多，zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質的性能，抗體(ti) 或蛋白質抗原吸附其上後保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為(wei) 塑料，可製成各種形式，在測定過程中，它作為(wei) 載體(ti) 和容器，不參與(yu) 化學反應，加之它的價(jia) 格低廉，所以被普遍采用。

　　聚苯乙烯載體(ti) 的形狀主要有三種：小試管、小珠和微量反應板。小試管的特點是還能兼作反應的容器，zui後放入分光光度計中比色。小珠一般為(wei) 直徑0.6cm的圓球，表麵經磨砂處理後吸附麵積大增加。如用特殊的洗滌器，在洗滌過程中使圓珠滾動淋洗，效果更好。zui常用的載體(ti) 為(wei) 微量反應板，於(yu) ELISA測定的產(chan) 品也稱為(wei) ELISA板，通用的標準板形是8×12的96孔式。為(wei) 便於(yu) 作少量標本的檢測，有製成8聯或l2聯孔條的，放入座架後，大小與(yu) 標準ELISA板相同。ELISA板的特點是可以同時進行大量標本的檢測，並可在特定的比色計上迅速讀出結果。現在已有多種自動化儀(yi) 器用於(yu) 微量反應板型的ELISA檢測，包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟，對操作的標準化極為(wei) 有利。

　　良好的ELISA板應該是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA板由於(yu) 配料的不同和製作工藝的差別，各種產(chan) 品的質量差異很大。因此每一批號的聚苯乙烯製品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為(wei) ：以一定濃度的人IgG(一般為(wei) 10ng/ml)包被ELISA板各孔後，每孔內(nei) 加入適當稀釋的酶標抗人IgG抗體(ti) ，保溫後洗滌，加底物顯色，終止酶反應後分別測每孔溶液的吸光度。控製反應條件，使各讀數在0.8左右。計算所有讀數的平均值。所有單個(ge) 讀數與(yu) 平均讀數之差應小於(yu) 10%.與(yu) 聚苯乙烯類似的塑料為(wei) 聚氯乙烯。作為(wei) ELISA固相載體(ti) ，聚氯乙烯板的特點為(wei) 質軟板薄，可切割，價(jia) 廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對蛋白質的吸附性能比聚苯乙烯高，但空白值有時也略高。

　　為(wei) 比較不同固相在某一ELISA測定中的優(you) 劣，可用以下方法加以檢驗：用其他免疫學測定方法選出一個(ge) 典型的陽性標本和一個(ge) 典型的陰性標本。將它們(men) 分別進行一係列稀釋後，在不同的固相載體(ti) 上按預定的ELISA操作步驟進行測定，然後比較測定結果。在哪一種載體(ti) 上陽性結果與(yu) 陰性結果判別zui大，這種載體(ti) 就是這一ELISA測定的zui合適的固相載體(ti) 。

　　除塑料製品外，固相酶免疫測定的載體(ti) 還有兩(liang) 種材料：一是微孔濾膜，如**纖維素膜、尼龍膜等，這類測定形式將在本章“膜載體(ti) 的酶免疫測定”中介紹。另一種載體(ti) 是以含鐵的磁性微粒製作的，反應時固相微粒懸浮在溶液中，具有液相反應的速率，反應結束後用磁鐵吸引作為(wei) 分離的手段，洗滌也十分方便，但需配備特殊的儀(yi) 器。