如何正確使用酶結合物？
1.酶結合物的稀釋液在稀釋液中常加入高濃度的無關(guan) 蛋白質（例如1%BSA或5%脫脂奶粉），通過競爭(zheng) 抑製酶結合物在固相載體(ti) 上的非特異性吸附。一般還加入能夠抑製蛋白質吸附於(yu) 塑料表麵的非離子型表麵活性劑，如吐溫20（0.05%的濃度較為(wei) 適宜）。
2.正確稀釋酶結合物酶結合物的合適工作濃度需要通過預實驗來確定，濃度過高易導致本底偏高，濃度過低則會(hui) 導致陽性信號的減弱。酶結合物在使用前稀釋，稀釋後的酶結合物不宜保存，因為(wei) 低濃度的酶結合物極易失活。

如何選擇合適的陽性對照？
陽性對照的基本組成應該盡量與(yu) 檢測樣本的組成一致，一般陽性對照多以含蛋白保護劑的緩衝(chong) 液為(wei) 基質，加入一定量的待檢物質。比如，以人血清為(wei) 標本的測定，陽性對照多用確定的病人血清或者以複鈣人血漿為(wei) 原料加入一定量標準品。如何選擇合適的陰性對照？陰性對照的基本組成也應該盡量與(yu) 檢測樣本的組成一致，先行檢測確定其中不含待檢物質。比如，檢測人血清標本時，陰性對照應該選擇正常人血清；檢測免疫動物血清中抗體(ti) 效價(jia) 時，陰性對照應該選擇該動物的免疫前血清。
如何選擇*化的包被條件？
1.包被抗原的選擇
包被抗原可分為(wei) 天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類。天然蛋白需經純化才能用直接吸附法包被，對於(yu) 含雜質較多的抗原可以采用間接捕獲法包被（先用能夠與(yu) 目的抗原反應的物質如抗體(ti) 直接吸附在酶標板上，再通過特異性反應使抗原固相化）。經純化的重組蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物，由於(yu) 分子量太小，往往難於(yu) 直接吸附在酶標板上，一般都先使其與(yu) 無關(guan) 蛋白質如BSA等偶聯，偶聯物吸附於(yu) 固相載體(ti) 上。
2.包被液的選擇一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩衝(chong) 液，如果包被的抗原在堿性條件下不穩定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩衝(chong) 液。
3.包被溫度的選擇通常是4-8度條件下過夜或者37度保溫2小時，我們(men) 強烈建議4-8度條件下包被，有利於(yu) 蛋白活性的保持。
4.包被濃度的選擇包被的zui適濃度隨固相載體(ti) 和包被物的性質變化，一般蛋白質的包被濃度為(wei) 1-5ug/ml，要明確針對特定包被抗原的zui適包被濃度需要通過實驗來確定。包板後需要封閉嗎？應該選擇什麽(me) 樣的封閉體(ti) 係？封閉是否必要，取決(jue) 於(yu) ELISA的模式及具體(ti) 的實驗條件。一般說來，雙抗體(ti) 夾心法，隻要酶標記物是高活性的，操作時洗滌*，不經封閉也可得到滿意的結果。而在間接法測定中，封閉一般是*的。常用的封閉劑有0.05%-0.5%的BSA、10%的小牛血清、1%明膠、5%的脫脂奶粉，AbMART使用5%脫脂奶粉，價(jia) 廉而且封閉能力強，不過5%脫脂奶粉隻適合短期內(nei) 使用，不宜保存，所以ELISA試劑盒中較少使用。