ELISA係統穩定的方法
係統穩定的方法
常用劑有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,比較價(jia) 廉,可以高濃度使用(5%-10%);還有一些稀有用到的各種動物血清(主要為(wei) 了排除相似蛋白幹擾)和酪蛋白等等。詳細的試驗還要有堅固的理論外也要實踐,看一下*可不可以應用到自己試驗當中去。但*選用什麽(me) ,要依據試驗詳細來實踐。應留意以下原理:因為(wei) 蛋白質與(yu) 聚苯乙烯固相載體(ti) 是通過物理吸附結合的,靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與(yu) 固相載體(ti) 表麵的疏水基團間的作用,這種物理吸附長短特異性的,受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響,大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團,故更易吸附到固相載體(ti) 表麵。小分子必需依賴和大的蛋白載體(ti) 偶聯後才能固定在固相載體(ti) 上。還有有的包被原可能不是蛋白,對於(yu) 和脂類物質或小分子物質我們(men) 要事先對其改造再加以包被,親(qin) 和素:先親(qin) 和素先包被載體(ti) ,加入化的DNA,這種包被方法平均、牢固,已擴大應用於(yu) 各種抗原物質的定量測定。常用的包被液除了剛才提到的pH9.6碳酸鹽緩衝(chong) 液,還有pH7.2的磷酸鹽緩衝(chong) 液和pH7-8的Tris-HCL緩衝(chong) 液等等。
檢測係統可謂是免疫學反應應用到科研出產(chan) 中zui為(wei) 敏捷的技術手段。自己也為(wei) 此苦惱過很長一段時間,跟著自己技術水平得進步,或多或少地也把握了ELISA體(ti) 係的脾氣,也是熟能生巧吧,現在做方陣,做已是輕車熟路了,以前檢測一種抗體(ti) 用整整一下戰書(shu) 還算得暈暈的,現在給我十個(ge) 八個(ge) 的從(cong) 包被到顯色,一個(ge) 工作日基本搞定。可是在新老手操縱過程中老是會(hui) 泛起或大或小的題目,本人在剛開始做ELISA時就麵對良多災題,固然有師兄師姐鋪路,但仍是經常做得烏(wu) 煙瘴氣,好比說花板,假陽性,全顯色,全部顯色,顯色比空缺還低。
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