ELISA競爭抑製法普遍存在的操作問題
競爭(zheng) 抑製法普遍存在的操作問題
兩(liang) 對半使用方法,其中HBSAg、HBsAb、HBeAg使用雙抗原/抗體(ti) 夾心法檢測,而HBcAb、HBeAb使用競爭(zheng) 抑製法檢測。 而競爭(zheng) 抑製法的原理:酶標抗體(ti) 與(yu) 樣本抗體(ti) 在同樣的體(ti) 係中,與(yu) 固相抗原競爭(zheng) 結合是等比關(guan) 係。原論上講,應該先將樣本與(yu) 酶標抗體(ti) 先行混勻,然後加入反應也進行。但實際工作中並非如此,都是分開加入反應孔。這樣會(hui) 造成先加入的先結合,與(yu) 後加入者並不是公平的關(guan) 係,因而也不符合等比原則。特別是在放置時間長,且溫度高的情況下,對結果有很大的影響。
第二軍(jun) 醫大學長海醫院對此造成的影響進行了研究。將陰性標本94份並用生理鹽水進行1:30稀釋,在加入標本後按下表時間放置後再加入酶標抗體(ti) ,然後檢測結果如下:
放置時間(min)陰性標本數臨(lin) 界值-標本A450nm值假陽性率(%)
從(cong) 上表可以看出,如果同時加入標本與(yu) 酶標抗體(ti) ,沒出現假陽性現象。2分鍾後再加入酶標抗體(ti) ,由於(yu) 標本比酶標抗體(ti) 先結合了兩(liang) 分鍾,因此出現了7.4%的假陽性。30分鍾後再加,假陽性高達57.4%。因此建議競爭(zheng) 抑製法的項目,加十個(ge) 樣本後立即加酶標抗體(ti) ,這樣對檢測結果沒有影響。
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