使用目的：

本試劑盒用於(yu) 測定小鼠血清、血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中甲肝抗體(ti) (HAV IgG)含量。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中小鼠甲肝抗體(ti) (HAV IgG)水平。用純化的抗原包被微孔板，製成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入甲肝抗體(ti) (HAV IgG)，再與(yu)  HRP 標記的抗原結合，形成抗原-抗體(ti) -酶標抗原複合物，經過*洗滌後加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的甲肝抗體(ti) (HAV IgG)呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在 450nm 波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠甲肝抗體(ti) (HAV IgG)濃度。

小鼠甲肝抗體(ti) (HAV IgG)elisa試劑盒組成：

1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1 瓶  7  終止液  6ml×1 瓶

2  酶標試劑  6ml×1 瓶  8  標準品（72ng/L）  0.5ml×1 瓶

3  酶標包被板  12 孔×8 條  9  標準品稀釋液  1.5ml×1 瓶

4  樣品稀釋液  6ml×1 瓶  10  說明書(shu)   1 份

5  顯色劑 A 液  6ml×1 瓶  11  封板膜  2 張

6  顯色劑 B 液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個(ge)

小鼠甲肝抗體(ti) (HAV IgG)elisa試劑盒標本要求：

1．標本采集後盡早進行提取，提取按相關(guan) 文獻進行，提取後應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗，可將標本放於(yu) -20℃保存，但應避免反複凍融

2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

36 ng/L  5 號標準品  150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

18 ng/L  4 號標準品  150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

9 ng/L  3 號標準品  150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

4.5 ng/L  2 號標準品  150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

2.25 ng/L  1 號標準品  150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其餘(yu) 各步操作相同） 、標準孔、待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然後再加待測樣品 10µl（樣品zui終稀釋度為(wei)  5 倍） 。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.  溫育：用封板膜封板後置 37℃溫育 30 分鍾。

4.  配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋後備用

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體(ti) ，甩幹，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒後棄去，如此

重複 5 次，拍幹。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7.  溫育：操作同 3。

8.  洗滌：操作同 5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鍾.

10. 終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液後 15 分鍾以內(nei) 進行。

小鼠甲肝抗體(ti) (HAV IgG)elisa試劑盒計算：

以標準物的濃度為(wei) 橫坐標，OD 值為(wei) 縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與(yu)  OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式， 將樣品的 OD 值代入方程式， 計算出樣品濃度， 再乘以稀釋倍數，即為(wei) 樣品的實際濃度。

注意事項：

1．試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鍾後方可使用，酶標包被板開封後如未

用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器，並經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控製在 5 分鍾內(nei) ，如標本數量多，使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，做複孔。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值

大於(yu) 標準品孔*孔的 OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）後再測定，計

算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5） 。

5． 封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染。

6．底物請避光保存。

7．嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

小鼠甲肝抗體(ti) (HAV IgG)elisa試劑盒保存條件及有效期：

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6 個(ge) 月