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人雌二醇(E2)酶聯免疫分析試劑盒實驗

點擊次數:840次 更新時間:2017-03-17

本試劑盒用於(yu) 測定人血清、血漿及相關(guan) 液體(ti) 樣本中雌二醇(E2)含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體(ti) 夾心法測定標本中人雌二醇(E2)水平。用純化的人雌二醇(E2)抗體(ti) 包被微孔板,製成固相抗體(ti) ,往包被單抗的微孔中依次加入雌二醇(  E2),再與(yu)  HRP標記的雌二醇(E2)抗體(ti) 結合,形成抗體(ti) -抗原-酶標抗體(ti) 複合物,經過*洗滌後加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP  酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雌二醇(E2)呈正相關(guan) 。用酶標儀(yi) 在   450nm 波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人雌二醇(E2)濃度。
標本要求
1.標本采集後盡早進行提取,提取按相關(guan) 文獻進行,提取後應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放於(yu) -20℃保存,但應避免反複凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑製辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
人雌二醇(E2)酶聯免疫分析試劑盒操作步驟
1.  標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。然後再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為(wei) 5倍)。加樣將樣品加於(yu) 酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板後置 37℃溫育30分鍾。
4.配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋後備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體(ti) ,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒後棄去,如此重複 5次,拍幹。
6.加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
7.溫育:操作同 3。
8.洗滌:操作同 5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鍾.
10.終止:每孔加終止液    50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應在加終止液後 15分鍾以內(nei) 進行。
人雌二醇(E2)酶聯免疫分析試劑盒注意事項
1.試劑盒從(cong) 冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30分鍾後方可使用,酶標包被板開封後如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(hui) 有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,並經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控製在 5分鍾內(nei) ,如標本數量多,使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,做複孔。如標本中待測物質含量過高(樣本  OD值大於(yu) 標準品孔*孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)後再測定,計算時請zui後乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5.封板膜隻限一次性使用,以避免交叉汙染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yan) 格按照說明書(shu) 的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀(yi) 讀數為(wei) 準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳(chuan) 染物處理。
9.本試劑不同批號組分不得混用。
10.如與(yu) 英文說明書(shu) 有異,以英文說明書(shu) 為(wei) 準。
保存條件及有效期
11.試劑盒保存:;2-8℃。
12.有效期:6個(ge)

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