實驗各類酸性停止液則會(hui) 使藍色轉變成黃色，此刻可用特定的波長（450 nm）測讀吸光值。
OPD底物顯色通常在室外溫或37 ℃反響20-30分鍾後即不再加深，再延伸反響時刻，可使本底值增高。
TMB受光照的影響不大，ELISA試劑盒可在室溫中置於(yu) 操作台上，邊反響調查成果。
這類停止劑尚能使藍色保持較長時刻（12-24小時）不褪，是目視判別的傑出停止劑。
但為(wei) 確保實驗成果的穩定性，宜在規則的恰當時刻閱覽成果。TMB經HRP作用後，約40分鍾顯色達高峰，隨即逐漸削弱，至2小時後即可*消退至無色。
反響的溫度和時刻仍是影響顯色的要素。
TMB的停止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑製劑均可使反響停止。
OPD底物液受光照會(hui) 自行變色，顯色反響應避光進行，顯色反響結束時加入停止液停止反響。OPD產(chan) 品用硫酸停止後，顯色由橙黃色轉向棕黃色。
實驗比色
比色前應先用潔淨的吸水紙拭幹板底附著的液體(ti) ，ELISA試劑盒然後將板正確放入酶標比色儀(yi) 的比色架中。
在加底物液顯色前，先將軟板邊際剪淨，這麽(me) ，此板就可*平妥坐入座架中。
以軟板為(wei) 載體(ti) 的實驗，需先將板置於(yu) 規範96孔的座架中，才可進行比色。
此刻酶催化無色的底物生成有色的產(chan) 品。
在定量測定中，加入底物後的反響溫度和時刻應按規則力求。
時刻通常不需要嚴(yan) 格控製，有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯色狀況恰當縮短或延伸反響時刻，及時判別。
在必定時刻內(nei) ，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時刻的延伸而呈色加強。
實驗恰當進步溫度有助於(yu) 加快顯色進行。