為(wei) 了防止因汙染或技術原因使培養(yang) 功虧(kui) 一簣，考慮到培養(yang) 細胞因傳(chuan) 代而遲早會(hui) 出現變異，有時因寄贈、交換和購買(mai) ，培養(yang) 細胞從(cong) 一個(ge) 實驗室轉運到另一個(ge) 實驗室，的策略是進行低溫保存。這對於(yu) 維持一些特殊細胞株的遺傳(chuan) 特性極為(wei) 重要。現簡要介紹深低溫保存法(－70℃~－196℃)的特點。細胞深低溫保存的基本原理是：在-70℃以下時，細胞內(nei) 的酶活性均己停止，即代謝處於(yu) *停止狀態，故可以保存。細胞低溫保存的關(guan) 鍵，在於(yu) 通過0~20℃階段的處理過程。在此溫度範圍內(nei) ，水晶呈針狀，極易招致細胞的嚴(yan) 重損傷(shang) 。
 
1.  細胞的凍存 
為(wei) 避免汙染造成的損失，zui小化連續細胞係的遺傳(chuan) 改變和避免有限細胞係的老化和轉化，需要凍存哺乳細胞。凍存細胞前，細胞應該特性化並檢查是否汙染。
有幾種普通培養(yang) 基用來凍存細胞。對於(yu) 包含有血清的培養(yang) 基，成分可能如下：
◆包含10%甘油的*培養(yang) 基，
◆包含10%二甲基亞(ya) 碸（DMSO）的*培養(yang) 基，
◆50%細胞條件培養(yang) 基和50%含有10%甘油的新鮮培養(yang) 基，
◆50%細胞條件培養(yang) 基和50%含有10%二甲基亞(ya) 碸的新鮮培養(yang) 基。
對於(yu) 無血清培養(yang) 基，一些普通的培養(yang) 基成分可能是：
◆50%細胞條件無血清培養(yang) 基和50%包含有7.5%二甲基亞(ya) 碸的新鮮的無血清培養(yang) 基，或
◆包含有7.5%二甲基亞(ya) 碸和10%細胞培養(yang) 級BSA的新鮮無血清培養(yang) 基。
 
（1）懸浮細胞
●計數將要凍存的活細胞。細胞應該處於(yu) 對數生。以大約200～400 g離心5分鍾沉澱細胞，使用移液管移去上清到zui小體(ti) 積，不要攪亂(luan) 細胞。
●以1×107到5×107細胞/ml密度，在包含有血清的冷凍培養(yang) 基中再次懸浮細胞，或者以0.5×107到1×107在無血清培養(yang) 基中，再次懸浮細胞。
●分裝進凍存管，將凍存管置於(yu) 濕冰上或放入4℃冰箱中，5分鍾內(nei) 開始冷凍步驟。
●細胞以1℃/分鍾進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然後轉移到液氮中貯存。
 
（2）貼壁細胞
●使用分離試劑從(cong) 基層分離細胞，分離時盡可能溫和，使對細胞的損傷(shang) 減少到zui小。
●在*生長培養(yang) 基中，再次懸浮分離細胞，確定有活力細胞數。
●以大約200 g離心5分鍾沉澱細胞。使用移液管移去上清到zui小體(ti) 積，不要攪亂(luan) 細胞。
●以5×106到1×106細胞/ml密度，在凍存液中懸浮細胞。
●分裝進凍存管，將凍存管置於(yu) 濕的冰上或放入4℃冰箱中，5分鍾內(nei) 開始冷凍步驟。
●細胞以1℃/分鍾進行冷凍，可以通過可編程序的冷凍器進行或者把隔離盒中的凍存管放到-70℃到-90℃的冰箱中，然後轉移到液氮中貯存。
 
2.  凍存細胞的複蘇 
凍存細胞較脆弱，要輕柔操作。凍存細胞要快速融化，並直接加入*生長培養(yang) 基中。若細胞對凍存劑（DMSO或甘油）敏感，離心去除凍存培養(yang) 基，然後加入*生長培養(yang) 基中。
 
（1）直接鋪板方法
●取出貯存細胞，37℃水浴中快速融化。
●直接用*生長培養(yang) 基鋪板細胞。1 ml凍存細胞使用10~20 ml*生長培養(yang) 基。進行活細胞計數，細胞接種應該至少在3×105活細胞/ml。
●培養(yang) 細胞12到24小時，更換新鮮的*生長培養(yang) 基，去除凍存劑。
 
（2）離心方法
●取出貯存細胞，37℃水浴中快速融化。
●把1到2 ml凍存細胞加入到大約25 ml*生長培養(yang) 基，輕輕混勻。
●以大約80x g離心2到3分鍾。
●棄去上清。
●在*生長培養(yang) 基輕輕再次懸浮細胞，並且進行活細胞計數。
●細胞鋪板，細胞接種應該至少為(wei) 3×105活細胞/ml。