在中一般有兩(liang) 次抗原抗體(ti) 反應，即加標本和加酶結合物後。抗原抗體(ti) 反應的完成需要有一定的溫度和時間，這一保溫過程稱為(wei) 溫育(incubation)，有人稱之為(wei) 孵育，在ELISA檢測試劑盒中似不恰當。
    ELISA檢測試劑盒屬固相免疫測定，抗原、抗體(ti) 的結合隻在固相表麵上發生。以抗體(ti) 包被的夾心法為(wei) 例，加入板孔中的標本，其中的抗原並不是都有均等的和固相抗結合的機會(hui) ，隻有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與(yu) 抗體(ti) 接觸。這是一個(ge) 逐步平衡的過程，因此需經擴散才能達到反應的終點。在其後加入的酶標記抗體(ti) 與(yu) 固相抗原的結合也同樣如此。這就是為(wei) 什麽(me) ELISA反應總是需要一定時間的溫育。
    溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實驗室中常用的保溫溫度，也是大多數抗原抗體(ti) 結合的合適溫度。在建立ELISA檢測試劑盒方法作反應動力學研究時，實驗表明，兩(liang) 次抗原抗體(ti) 反應一般在37℃經1-2小時，產(chan) 物的生成可達。為(wei) 加速反應，可提高反應的溫度，有些試驗在43℃進行，但不宜采用更高的溫度。抗原抗體(ti) 反應4℃更為(wei) *，在放射免疫測定中多使反應在冰箱中過夜，以形成zui多的沉澱。但因所需時間太長，在ELISA檢測試劑盒中一般不予采用。
    保溫的方式除有的ELISA檢測試劑盒儀(yi) 器附有特製的電熱塊外，一般均采用水浴，可將ELISA板置於(yu) 水浴箱中，ELISA檢測試劑盒板底應貼著水麵，使溫度迅速平衡。為(wei) 避免蒸發，板上應加蓋，也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應板漂浮在水麵上。若用保溫箱，ELISA板應放在濕盒內(nei) ，濕盒要選用傳(chuan) 熱性良好的材料如金屬等，在盒底墊濕的紗布，zui後將板放在濕紗布上。
    濕盒應先放在保溫箱中預溫至規定的溫度，特別是在氣溫較低的時候更應如此。無論是水浴還是濕盒溫育，反應板均不宜疊放，以保證各板的溫度都能迅速平衡。室溫溫育的反應，操作時的室溫應嚴(yan) 格限製在規定的範圍內(nei) ，標準室溫溫度是指20-25℃，但具體(ti) 操作時可根據說明書(shu) 的要求控製溫育。室溫溫育時，ELISA板隻要平置於(yu) 操作台上即可。應注意溫育的溫度和時間。為(wei) 保證這一點，一個(ge) 人操作時，一次不宜多於(yu) 兩(liang) 塊板同時測定。
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