1．固相載體(ti) 的選擇

    載體(ti) 的種類很多，其中包括纖維素、交聯右旋糖酐、葡萄球菌聚苯乙烯、聚丙烯酰胺等。從(cong) 使用形式上可有凹孔平板、試管、珠粒等。

    聚苯乙烯凹孔板是應用zui廣泛的一種載體(ti) 。聚苯乙烯塑料微量滴定板吸附蛋白的性能好，操作簡便、用量小，適於(yu) 大批檢查。

    由於(yu) 聚苯乙烯的工藝過程不夠穩定,造成各批次差異較大。所以進行ELISA之前，必須進行篩選。

檢查方法：

⑴ 吸附性能的檢查：先加抗體(ti) 包被，然後加入同一稀釋度的酶標抗體(ti) ，zui後加底物、顯色、測OD值,求出總平均OD值,再求出每相鄰兩(liang) 孔的OD平均值,此均值在總均值的±10%以內(nei) 為(wei) 合格,若中間孔與(yu) 四周孔OD值相差太大，或一側(ce) 與(yu) 另一側(ce) 孔OD值相差較大均屬不合格。

⑵ 對比測定陽性血清與(yu) 陰性血清，觀察是否存在明顯差異，若二者OD值相差於(yu) 10倍以上者為(wei) 合格。

    板的處理。新板一般不用處理,用蒸餾水衝(chong) 洗即可應用。板用一次即廢。但不少實驗工作者認為(wei) 用超聲波處理，清潔液Tritonx100、20%乙二醇處理仍可應用。但發現空白對照顯色較深和陽性樣品顯色結果不理想時，應棄去不用。

2．載體(ti) 的吸附條件

    載體(ti) 的吸附均為(wei) 物理吸附。吸附的多少取決(jue) 於(yu) PH值、溫度、蛋白濃度、離子強度以及吸附時間等。

    較好的吸附條件是：離子強度為(wei) 0.05Mol/L～0.10Mol/L，pH9.0～pH9.6碳酸鹽緩衝(chong) 液，蛋白濃度為(wei) 1μg/ml~100μg/ml，4℃過ye或37℃3h。

3．酶標抗體(ti) 使用濃度的確定

    於(yu) 聚苯乙烯板孔中加足夠量的抗體(ti) 包被,溫育一定時間，衝(chong) 洗、把酶標結合物倍比稀釋，每個(ge) 稀釋度加2孔,溫育、衝(chong) 洗、再加底物顯色、比色。以OD值為(wei) 縱坐標,酶標結合物的稀釋度為(wei) 橫坐標，製作曲線。找出OD值為(wei) 1時，相對應的酶標抗體(ti) 稀釋度為(wei) zui適酶標抗體(ti) 稀釋度。

    這個(ge) 稀釋度是指在這種條件下的zui適稀釋度，換個(ge) 條件就不是zui適的了。如1：400的酶標抗體(ti) 稀釋度溫育6h可與(yu) 1：6 400稀釋度溫育24h結果相同。所以一旦條件確定之後，就不要變更，以保證結果的重複性和相對的準確性。

    此zui適酶標抗體(ti) 稀釋度可做為(wei) 工作濃度，也可提高半個(ge) 至一個(ge) 滴度，但不能提高過高，否則非特異性顯色增加。

    酶標抗體(ti) 的滴度反映酶標抗體(ti) 的質量，也可以此比較酶標結合物的優(you) 劣。有材料報道認為(wei) 1：320滴度為(wei) 合格,1：1 000以上更好。酶標抗體(ti) 滴度越高，用於(yu) 工作濃度的稀釋倍數就越大，敏感性就越高，非特異性反應就越低。
純度：    牛七堿            Szechenyine    ≥98%        
純度：    派利文堿    Perivine    ≥98%        
純度：    七葉苷    Esculin    ≥98%
純度：    漆黃素            Fisetin    ≥98%        
純度：    羥基酪醇    Hydroxytyrosol    ≥97%        
純度：    羥基吳茱萸堿    Hydroxyevodiamine    ≥98%        
純度：    茄尼醇    Solanesol    98%
純度：    芹菜苷元            Apigenin    ≥98%        
純度：    芹黃素            Apigenin    ≥98%        
純度：    秦艽甲素    Gentiannine    ≥95%
純度：    秦皮苷            Fraxin    ≥98%        
純度：    秦皮乙素            Aesculetin    ≥98%        
純度：    青陽參苷元            Qingyangshengenin    ≥98%        
純度：    人參苷元F11        Aglycone F11    ≥97%
純度：    鞣花酸    Ellagic acid    95% 98%