試驗的原理好像很簡單，不外乎固定抗原，增加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗刷和關(guan) 閉。可是，即使是平淡無奇的洗刷和關(guan) 閉，假如做得不太好，也有或許毀了全部試驗。在星空体育官网中国試驗結束時，咱們(men) 是否能取得有意義(yi) 的信息，這在很大程度上取決(jue) 於(yu) 成果的信噪比。布景噪音會(hui) 影響您對成果的判別。怎麽(me) 下降ELISA的布景，下麵有一些tips。
洗刷很主要
洗刷過程看似很無聊，本來很主要，由於(yu) 假如未的資料（如非特異的抗體(ti) 或檢查試劑）殘留在微孔板中，那麽(me) 它會(hui) 增加布景噪音。如有必要，可增加洗刷液中的鹽濃度，這會(hui) 阻止非特異反響。假如布景過高，而您置疑洗刷不行時，能夠測驗增加洗刷次數。
抗體(ti) 濃度須優(you) 化
咱們(men) 通常會(hui) follow師兄師姐留下來的操作過程，可是假如試劑稍有不一樣，則或許需求優(you) 化抗體(ti) 的量。記住，非特異的抗體(ti) 會(hui) 增加布景。為(wei) 了避免這一點，切勿運用過多的一抗或二抗。
ELISA試劑盒假如您一向被布景疑問所困惑，那麽(me) 或許您該花些時刻來優(you) 化關(guan) 閉液。這或許需求時刻，但也是值得的。目前主要有兩(liang) 種類型的關(guan) 閉液：蛋白和非離子型去汙劑。您運用的類型須取決(jue) 於(yu) 多個(ge) 因素，包含微孔板的外表試劑、吸附的抗原、您的抗體(ti) 和檢查試劑。好的關(guan) 閉液應下降非特異性，但它不應當與(yu) 抗原、抗體(ti) 或檢查試劑發作相互作用。
zui常用的非離子型去汙劑是Tween-20。這種關(guan) 閉液便宜、穩定，在去掉洗刷過程中的一些非特異上很有用。但它們(men) 隻在存在時起作用，由於(yu) 很簡單被洗掉。因而一切洗刷液中也有必要增加關(guan) 閉液。請勿運用高濃度（正常濃度為(wei) 0.01-0.1%），它會(hui) 下降特異，發作假陰性。另一個(ge) 選擇是運用蛋白和非離子型去汙劑這兩(liang) 種關(guan) 閉液，後者可幫忙洗刷過程中的關(guan) 閉。
蛋白關(guan) 閉液則有所不一樣，是持久的。它們(men) 與(yu) 敞開位點並關(guan) 閉，一起穩定與(yu) 微孔板的抗原分子。常用的蛋白關(guan) 閉液包含牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚明膠。血清組分的內(nei) 涵多樣性可使它有用攔截很多不一樣類型的分子相互作用。不過，它的缺點在於(yu) 能與(yu) Protein A和IgG抗體(ti) 相互作用。解決(jue) 這個(ge) 疑問的一種方法是運用雞或魚的正常血清。
另一點也很清楚明了：切勿運用過多的檢查。假如濃度過高，或許未準確稀釋，則會(hui) 致使高布景。也不要顯色過度，如有必要，優(you) 化一下何時應參加停止液。
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