標本因素對胱抑素C星空体育官网中国測定的影響
人們(men) 往往以反應本底的好壞來衡量反應試劑盒,穩定性也成問題。值得欣慰的是也有堅持試劑盒高的流行病學敏感度,科學得對待反應結果。本文就標本因素對人ELISA試劑盒測定的影響做如下討論。
血清是zui常用的人ELISA試劑盒標本,血漿一般可視為(wei) 與(yu) 血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結果主要是幹擾性物質所致,分為(wei) 內(nei) 源性物質和外源性物質兩(liang) 種:
1. 內(nei) 源性物質 有人認為(wei) 大約40%的人血清標本中含有非特異性幹擾物質,可以不同程度影響檢測結果。常見的幹擾物質有:類風濕因子、補體(ti) 、嗜異性抗體(ti) 、嗜靶抗原自身抗體(ti) 、醫源性誘導的抗鼠Ig (s)抗體(ti) 、交叉反應物質和其它物質等。
(1)類風濕因子
人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)可以與(yu) 人ELISA試劑盒係統中的捕獲抗體(ti) 及酶標記二抗的FC段直接結合,從(cong) 而導致假陽性。
解決(jue) 該情況的辦法是:
①用F(ab)2替代完整的IgG;
②標本用聯有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);③檢測抗原時,可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。
(2)補體(ti) ELISA係統中固相一抗和標記二抗過程中,人ELISA試劑盒抗體(ti) 分子發生變構,其FC段的補體(ti) C1q分子結合位點被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,人ELISA試劑盒從(cong) 而造成假陽性。解決(jue) 的辦法是:①用EDTA稀釋標本;②用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。
(3)嗜異性抗體(ti) 人類血清中含有能與(yu) 齧齒類動物(如鼠等)Ig (s) 結合的天然嗜異性抗體(ti) ,可將ELISA係統中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。解決(jue) 的辦法是:可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig (s) ,但加入量不足或亞(ya) 類不同時無效。
(4)嗜靶抗原的自身抗體(ti) 抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體(ti) ,有時能與(yu) 靶抗原結合形成複合物,在方法中均可幹擾抗原抗體(ti) 測定結果。為(wei) 避免以上情況出現,測定前需用理化方法將其解離後再測定。
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