細胞名稱 膀胱鱗癌細胞;SCaBER
形態特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 源於(yu) 一位58歲患有膀胱鱗癌的白人男性患者,含有不常見的G6PDA型同工酶。
培養(yang) 條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS;1%NEAA,1mM丙酮酸鈉
傳(chuan) 代方法: 1:3~1:6傳(chuan) 代;2~3天換液1次。
傳(chuan) 代情況:
凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS
支原體(ti) 檢測: 培養(yang) 法(-)
公司細胞廣泛用於(yu) 國內(nei) 院校的細胞生物學研究,作為(wei) 實驗項目研究。下列產(chan) 品詳細介紹:
產(chan) 品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
膀胱鱗癌細胞;SCaBER | 貼壁生長 | EY-X63411 |
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置於(yu) 4℃ 30~60 分鍾→ (-20 ℃30 分鍾*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲(chu) 存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置於(yu) 已設定程序之可程序降溫機中每分鍾降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲(chu) 存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗要點及說明:
1.本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ,而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ,懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃,並經過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態一致的細胞,可以使用較大的培養(yang) 皿,但不宜過大,以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
實驗報告:
一、分離與(yu) 培養(yang) :
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然後用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之後用滴管吹打製成單細胞懸液,自然沉澱並收集上清,用含10% FBS培養(yang) 基終止消化後4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min後,按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置,重複此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉澱細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yang) 基混懸,接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶,放置於(yu) 37℃ ,5%CO2 培養(yang) 箱中培養(yang) ;
5、差速貼壁1h後,吸出培養(yang) 基,按實驗需要接種於(yu) 6孔板中繼續培養(yang) ;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yang) 基,用溫育的PBS衝(chong) 洗細胞2次,每次10min,然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS衝(chong) 洗細胞2次,每次10min,然後在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS衝(chong) 洗細胞2次,每次10min,然後在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS衝(chong) 洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS衝(chong) 洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yang) 液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yang) 液洗滌細胞一次,以去除殘餘(yu) 的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,並且肉眼觀察培養(yang) 器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yang) 液,吹打下細胞,即可直接用於(yu) 後續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從(cong) 培養(yang) 器皿底部脫落, 直接用細胞培養(yang) 液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉澱細胞,盡量去除細胞消化液後,加入含血清的*培養(yang) 液重新懸浮細胞,即可用於(yu) 後續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化後可以充分打散組織為(wei) 宜。
雜交瘤細胞株;4F4形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-MCCC1 Polyclonal Antibody
雜交瘤細胞株;1C1H11形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-COG7 Polyclonal Antibody
雜交瘤細胞株;1584CT280.63.79形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長PE-Cy3標記的驢抗人IgG
雜交瘤細胞株;PCV2形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Alexa Fluor 555標記的羊抗雞IgG
雜交瘤細胞株;7G11形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長PE-Cy5.5標記的羊抗小鼠IgG
斑馬魚胚胎細胞係;ZEBDaniorerioZEB形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長PE-Cy3標記的鼠抗人IgG單克隆抗體(ti)
雜交瘤細胞株;mBEX形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長PE-Cy5.5標記的小鼠抗兔IgM
雜交瘤細胞株;PEDV形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Alexa Fluor 555標記的羊抗兔IgG
轉基因小鼠細胞;MMHRL5形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-MMP20 Polyclonal Antibody
雜交瘤細胞株;DTMUV-E-10A7形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Alexa Fluor 350標記的兔抗雞IgM
小鼠成纖維細胞;MFC/HL-041MurineFibroblastCellsMFC/HL-041形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長PE標記的小鼠抗兔IgM
雜交瘤細胞株;STMN1-C16形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Alexa Fluor 488標記的兔抗羊IgM
大鼠正常肺上皮細胞;RNLEC/HL-039RatNormalLungEpithelialCellsRNLEC/HL-039形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-CDKN1B Polyclonal Antibody
小鼠正常上皮細胞;MNTEC/HL-042MurineNormalTesticularEpithelialCellsMNTEC/HL-042形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-COG7 Polyclonal Antibody
高轉移卵巢癌細胞係;SKOV3-M形態特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Alexa Fluor 555標記的兔抗豚鼠IgG
大鼠正常甲狀腺上皮細胞;RNTEC/HL-040RatNormalThyroidEpithelialCellsRNTEC/HL-040形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 懸浮生長Anti-PPP1R2 Polyclonal Antibody
膀胱鱗癌細胞;SCaBER兔子中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒ICDELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
兔子β血小板球蛋白/β血栓環蛋白(β-TG)ELISA試劑盒ICEELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
兔子血小板因子4(PF-4/CXCL4)ELISA試劑盒icELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
兔8-異構前列腺素(8-epi-PGF2α)ELISA試劑盒IDOELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
兔基質金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA試劑盒IDSELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
兔超敏C反應蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒IDSELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
兔型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒IDUAELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
兔型纖溶酶原激活物受體(ti) (PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒IDUAELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。