實驗要點及說明：
1．本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ，而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃，並經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養(yang) 皿，但不宜過大，以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
公司細胞廣泛用於(yu) 國內(nei) 院校的細胞生物學研究，作為(wei) 實驗項目研究。下列產(chan) 品詳細介紹：
產(chan) 品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
腎癌Wilms細胞；G401 | 貼壁生長 | EY-X63235 |
細胞名稱 腎癌Wilms細胞；G401
形態特性: 上皮樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞來源於(yu) 一名3個(ge) 月大的嬰兒(er) 的腎Wilms瘤，由於(yu) 該類腫瘤分類的改變，經Garvin等鑒定後發現該細胞來源於(yu) 腎橫紋肌樣瘤。該細胞分泌腎母細胞生長因子（nephroblastgrowthfactor，NB-GF)。
培養(yang) 條件: McCoy's5AMedia(ModifiedwithTricine)10%FBS
傳(chuan) 代方法: 1:3傳(chuan) 代；3~4天1次。
傳(chuan) 代情況: C5
凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS
支原體(ti) 檢測: 培養(yang) 法（-）
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置於(yu) 4℃ 30~60 分鍾→ （-20 ℃30 分鍾*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chu) 存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置於(yu) 已設定程序之可程序降溫機中每分鍾降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chu) 存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與(yu) 培養(yang) ：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液，自然沉澱並收集上清，用含10% FBS培養(yang) 基終止消化後4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min後，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置，重複此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yang) 基混懸，接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶，放置於(yu) 37℃ ，5％CO2 培養(yang) 箱中培養(yang) ；
5、差速貼壁1h後，吸出培養(yang) 基，按實驗需要接種於(yu) 6孔板中繼續培養(yang) ；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yang) 基，用溫育的PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS衝(chong) 洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS衝(chong) 洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yang) 液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yang) 液洗滌細胞一次，以去除殘餘(yu) 的血清。
②加入少量生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，並且肉眼觀察培養(yang) 器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yang) 液，吹打下細胞，即可直接用於(yu) 後續實驗。
④如果發現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從(cong) 培養(yang) 器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yang) 液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉澱細胞，盡量去除細胞消化液後，加入含血清的*培養(yang) 液重新懸浮細胞，即可用於(yu) 後續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化後可以充分打散組織為(wei) 宜。
抗丙型肝炎病膜區抗原單克隆抗體(ti) 雜交瘤細胞株；HCVEA-246形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長Human BMP-9 ELISA KIT
抗呼吸道合胞病單克隆抗體(ti) 雜交瘤細胞株；RSV-4C1形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長Human PDGF-BB ELISA KIT
抗戍型肝炎病單克隆抗體(ti) 雜交瘤細胞株；HEV-4形態特性: 淋巴母細胞樣生長特性: 半貼壁生長Rabbit IL-1b ELISA Kit
小鼠胚胎細胞；SC-1形態特性: 成纖維細胞樣生長特性: 貼壁生長Human IL-18 Bpa ELISA KIT
小鼠結締組織L細胞株929克隆；L-929[L929]形態特性: 成纖維細胞樣生長特性: 貼壁生長Human VEGF R1 ELISA KIT
非洲綠猴腎細胞；CV-1形態特性: 成纖維細胞樣生長特性: 貼壁生長Mouse AXL ELISA KIT
喹喔啉Human RCC1 ELISA Kit
小鼠雜交瘤PTA-1626拉丁屬名: Monilinia fructicola 4-羥基吲哚Human RCHY1 ELISA Kit
鼠B淋巴瘤係拉丁屬名: Micrococcus luteus4-羥基吲哚Human RBM26 ELISA Kit
雜交瘤規格: 冰袋泡沫盒快遞Bradykinin Fragment 1-7Human ABCB5(ATP-binding cassette sub-family B member 5) ELISA Kit
抗鼠CD4單克隆注意事項: 僅用於科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用於人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用Bradykinin Fragment 1-5Human RBP2 ELISA Kit
雜交瘤CD25拉丁屬名: Bacillus nealsonii氯化耐爾藍Human RBM28 ELISA Kit
人間質-永生化拉丁屬名: Debaryomyces hansenii var. fabryiHuman RBM39 ELISA Kit
人內膜癌注意事項: 僅用於科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用於人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用Human RBM4 ELISA Kit
人卵巢癌用途: 害蟲生物防治2-巰基苯並惡唑Human RBM19 ELISA Kit
6T-CEM（人T白血病）用途: 研究2-巰基苯並惡唑Human RBMS1 ELISA Kit
人肝癌（高轉）-熒光素梅標記拉丁屬名: Polaromonas vacuolata2-巰基苯並惡唑Human RBM24(RNA Binding Motif Protein 24) ELISA Kit
人原髓白血病-熒光素梅標記拉丁屬名: Enterobacter aerogenes Hormaeche and Edwards磺酸銀Human RBMS2 ELISA Kit
人前列腺癌-熒光素梅標記拉丁屬名: Brucella sp.磺酸銀Human RBM25 ELISA Kit
小鼠肺上皮-熒光素梅標記拉丁屬名: Halopelagius inordinatus乙基氯化鎂Human RBM26 ELISA Kit
人腦星形膠質母瘤-熒光素梅標記拉丁屬名: Flammulina velutipes乙基氯化鎂Human RBP2 ELISA Kit
人非小肺癌-綠色+熒光素酶標記用途: 研究3,4-環氧環己基-3,4-環氧環己酸酯Human ABCB5(ATP-binding cassette sub-family B member 5) ELISA Kit
人腎透明腺癌-紅色+熒光素酶標記注意事項: 僅用於科學研究或者工業應用
腎癌Wilms細胞；G401小鼠纖溶酶抗纖溶酶複合物(PAP)ELISA試劑盒ALCAMELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
小鼠血管性血友病因子/瑞斯托黴素輔因子(vWF)ELISA試劑盒ALDELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
小鼠Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒ALDELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
小鼠Ⅸ(FⅨ)ELISA試劑盒ALDELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
小鼠Ⅷ相關(guan) 抗原(FⅧ-Ag)ELISA試劑盒ALDHELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
小鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒ALGELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
小鼠抗α-胞襯蛋白抗體(ti) IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA試劑盒ALKELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
小鼠心肌營養(yang) 素1(CT-1)ELISA試劑盒ALOX-5ELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
