細胞名稱 乳腺癌細胞；BT-20
形態特性: 上皮細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞1958年由E.Y.Lasfargues和L.Ozzello建係，源自一位74歲白人女性的乳腺癌組織。該細胞表達WNT3和WNT78。TNFalpha抑製該細胞生長。該細胞雌激素受體(ti) 陰性，但表達5'外顯子缺失的雌激素mRNA。
培養(yang) 條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)10%FBS
傳(chuan) 代方法: 1:2～1:4傳(chuan) 代，2～3天換液一次
傳(chuan) 代情況: C3
凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS
支原體(ti) 檢測: 培養(yang) 法（-）
產(chan) 品名稱 | 乳腺癌細胞；BT-20 |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63834 |
產(chan) 品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體(ti) ，包括新鮮菌液和冰凍菌體(ti) 。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鍾-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分，保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時，背景幹擾低。
7、 蛋白酶抑製劑抑製了蛋白的降解，蛋白酶抑製劑配方優(you) 化。蛋白酶抑製劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑製劑；每一種抑製劑可特異性抑製某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(you) 化的組成使其可以抑製幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA，與(yu) 金屬螯和層析等兼容。
培養(yang) 操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲(si) 綢布擦拭幹淨，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yang) 板（每孔一片）或培養(yang) 皿中（每個(ge) 平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射範圍內(nei) 20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yang) 板中，使蓋玻片*浸在培養(yang) 液中；
5．將培養(yang) 板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yang) 板底部2/3麵積時，將培養(yang) 板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗後即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明：
1．本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ，而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃，並經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養(yang) 皿，但不宜過大，以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
操作流程：
1.1主要試劑與(yu) 儀(yi) 器：倒置相差顯微鏡（日本 olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。
1.2 hek-293細胞的複蘇培養(yang) 傳(chuan) 代及凍存：
1.2.1 細胞的複蘇培養(yang) 從(cong) 液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,並不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒後打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yang) 液（37℃預熱，8～10倍體(ti) 積）離心管內(nei) ,稍微吹打混勻,然後1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yang) 液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶內(nei) ，在37℃、5％co2及飽和濕度下培養(yang) 。
1.2.2 細胞傳(chuan) 代 原代培養(yang) 的hek－293細胞48h換液1次，細胞長至60%～70%融合時，用0.25%消化1～2min，將培養(yang) 瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散，為(wei) 使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次，獲得細胞懸液，然後加入倍量的培養(yang) 基，溫和混勻，吸管分裝混合液，傳(chuan) 代擴增細胞。
1.3 細胞形態的觀察 在倒置顯微鏡下觀察並記錄細胞的生長情況及形態特征。
1.4 細胞的計數 常規消化細胞，待細胞變圓、脫壁並浮起，加入少量培養(yang) 基離心，再用pbs重懸並吹打製成細胞懸液。在細胞計數板蓋玻片的一側(ce) 加微量細胞懸液，用10×物鏡觀察計數板四角大方格細胞數，按公式計算出細胞數。細胞數/ml原液＝(四方格細胞數之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數生的細胞，以0.25％消化成單細胞懸液，計數後分別接種於(yu) 12個(ge) 25cm2培養(yang) 瓶中，每兩(liang) 小時隨機取出3瓶細胞，吸除培養(yang) 基及未貼壁細胞，加入胰消化酶消化、計數已貼壁細胞，取其平均值，按照公式：貼壁率(%)=(已貼壁細胞數/接種細胞數) ，計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數生的細胞用消化製成單細胞懸液，以1×104/孔接種於(yu) 24孔板，每孔加入1ml培養(yang) 基。每天隨機取3孔，計數每孔細胞的數目並計算平均值。
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胱抑素SN檢測試劑盒
: Pseudomonas frederiksbergensis4-氨基-3-羥基苯甲酸Human RCBTB2 ELISA Kit
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Wistar大鼠骨髓MSCWistar大鼠骨髓間充質幹拉丁屬名: Bipolaris oryzae5H-5-甲基-6,7-二氫環戊基吡Human Recoverin ELISA Kit
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黑化大家鼠肺成纖維拉丁屬名: Burkholderia sp.五乙二單甲Human RCBTB1 ELISA Kit
大鼠胚肌拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae脲基三乙氧基矽烷Human RCBTB1 ELISA Kit
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鼠胸腺激酶缺陷株用途: 產延胡索酸四乙二單甲Human REC8 ELISA Kit
小鼠成纖維係拉丁屬名: Bacillus subtilis2-乙酰基-3-甲基吡Human RCBTB2 ELISA Kit
小鼠黑色素瘤係拉丁屬名: Hymenobacter sp.2-乙酰基-3-甲基吡Human RCC1 ELISA Kit
小鼠骨骼肌成纖維拉丁屬名: Lactobacillus helveticus2-乙酰基-3-甲基吡Human RCL1 ELISA Kit
小鼠淋巴瘤用途: 與綠葉、銀葉山螞蝗共生固氮2,3-二甲基喹喔啉Human Recoverin ELISA Kit
逆轉錄病包裝的NIH3T3拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae Hansen2,3-二甲基喹喔啉Human Recoverin ELISA Kit
鼠肉瘤拉丁屬名: Bacillus cereus6-硝基-2,3-二羥基喹喔啉Human RCBTB2 ELISA Kit
小鼠IL-3依賴性注意事項: 僅用於科學研究或者工業應用等非醫療目的，不可用於人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用6-硝基-2,3-二羥基
乳腺癌細胞；BT-203%化鈉葡萄糖發酵管（產(chan) 氣）規格：10支/盒用途：用於(yu) 副溶血性弧菌的生化鑒定（GB）。
誌賀氏菌生化鑒定試劑盒規格：17支/盒用途：用於(yu) 誌賀氏菌的生化鑒定。
致瀉大腸埃希氏菌生化鑒定試劑盒規格：8支/盒用途：用於(yu) 致瀉大腸埃希氏菌的生化鑒定。
發酵管b規格：10支/盒用途：用於(yu) 乳杆菌的生化鑒定。
苦杏仁甙發酵管c規格：10支/盒用途：用於(yu) 阪崎腸杆菌的生化鑒定。
明膠生化管規格：10支/盒用途：用於(yu) 細菌的生化鑒定。
