1）將培養(yang) 基在37℃水浴鍋預熱；準備一個(ge) 15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yang) 基。
2）將凍存細胞從(cong) 液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中複溫（可準備一潔淨的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出後迅速放入燒杯內(nei) ，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nei) 解凍，使細胞能盡快通過易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，避免引起汙染。
3）用75%酒精擦拭凍存管後再置於(yu) 超淨台內(nei) ，將管內(nei) 細胞轉移至準備好的離心管內(nei) ，輕輕吹打液體(ti) ，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chan) 生氣泡。用新鮮培養(yang) 基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nei) 。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yang) 基，吹打製成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nei) ，補加適量的培養(yang) 基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nei) 培養(yang) 。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yang) 基以去除死細胞。繼續培養(yang) ，待細胞長至80~90%匯合時正常傳(chuan) 代。一般剛複蘇的細胞需經過2~3次傳(chuan) 代，細胞活力恢複後才能進行後續的實驗。
商品描述：
產(chan) 品名稱 | MEM（無酚紅 ） 培養(yang) 基 | 規格 | 500ml |
用途 | 僅(jin) 供科研研究實驗 | 貨號 | EY-XP4269 |
產(chan) 品介紹
Minimum Essential Medium（MEM）
也稱低必需培養(yang) 基，它僅(jin) 含有12種必需氨基酸、穀氨酰an和8種維生素。成分簡單，可廣泛適應各種已建成細胞係和不同地方的哺乳動物細胞類型的培養(yang) 。MEM-Alpha一般用於(yu) 培養(yang) 一些難培養(yang) 細胞類型，而其它沒有特殊之處的細胞株則幾乎均可采用MEM來培養(yang) 。
培養(yang) 基主要成份表
（+） 1000mg/L D-葡萄糖
（+） 2200mg/L NaHco3
（+） 292mg/L L-穀氨酰an
（+） Earle’s 平衡鹽
（-） MEM 非必需氨基酸
（-） 酚 紅
運輸和保存
放置於(yu) 含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸（儲(chu) 存條件2-8℃ 避光儲(chu) 存）產(chan) 品保質期12個(ge) 月。
注意事項：
僅(jin) 限科研用。
培養(yang) 體(ti) 係中的一些組分是對人體(ti) 健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yang) 體(ti) 係的液體(ti) 和有培養(yang) 體(ti) 係的液體(ti) 殘留的容器內(nei) 部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水衝(chong) 洗即可。
細胞培養(yang) 步驟：
一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：
1） 準備DMEM-H培養(yang) 基(添加NaHCO3 1.5g/L)，90%；胎牛血清，10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養(yang) 基，使293T細胞懸浮生長。
2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。
3） 凍存液：90%培養(yang) 基，10%DMSO，現用現配。液氮儲(chu) 存。
二． 細胞處理：
1） 複蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yang) 基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。第二天換液並檢查細胞密度。
2） 細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。
對於(yu) 貼壁細胞，傳(chuan) 代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落，迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加少量培養(yang) 基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yang) 基，輕輕打勻後吸出，在1000RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 液後吹勻。
4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yang) 基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yang) 基後加入少量，細胞變圓脫落後，加入約1ml含血清的培養(yang) 基後加入凍存管中，再添加10%DMSO後進行凍存。
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置於(yu) 4℃ 30~60 分鍾→ （-20 ℃30 分鍾*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chu) 存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置於(yu) 已設定程序之可程序降溫機中每分鍾降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chu) 存。-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
公司正在出售的產(chan) 品：
人肺腺癌細胞 | 小鼠原代股動脈內(nei) 皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
小鼠睾丸支持上皮細胞 | 小鼠原代肺巨噬細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
牛乳腺上皮細胞 | 小鼠原代脊髓成纖維細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
幼蚊細胞 | 人原代角膜基質細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
上頜牙齦癌頸淋巴結轉移癌 | 小鼠原代結腸成纖維細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
人髓核細胞 | 人原代肺成纖維細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
大鼠星形膠質細胞 | 人原代小氣道上皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
小鼠腎小球內(nei) 皮細胞 | 兔原代頸靜脈內(nei) 皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
人乳腺成纖維細胞 | 小鼠原代腹腔主動脈平滑肌細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
人肝星狀細胞 | 人原代乳腺導管上皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
Cas9穩定表達的人食管癌細胞；EC109-Cas9-572 | 小鼠原代肺微血管周細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
人胚肺成纖維細胞 | 大鼠原代腦膜細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
人急性淋巴白血病細胞 | 人原代腦皮層神經元細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
人多發性骨髓瘤白血病細胞 | MEM（無酚紅 ） 培養(yang) 基兔原代臍帶間充質幹細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
人結腸腺癌細胞 | 人原代眼眶成纖維細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基 |
