商品屬性：

商品詳情：
別稱 MDBK (NBL-1); NBL-1; Madin-Darby Bovine Kidney; Madin Darby Bovine Kidney

種屬 牛

年齡（性別） 雄性，成年

組織來源 腎；正常細胞

生長特性 貼壁細胞

細胞形態 上皮細胞樣

背景描述 MDBK(NBL-1)細胞是由S·H·Madin和N·B·Darby在1957年2月18日從(cong) 一隻表觀正常的成年牛腎髒建立的。1973年，這株MDBK(NBL-1)細胞被牛病毒性痢疾病毒(BVDV)感染；1982年，發現了一株未被BVDV感染的MDBK(NBL-1)細胞株，此細胞最初來自ATCC1967年7月第96代的凍存管。MDBK(NBL-1)細胞的後代經NVSL檢測，未發現被任何病毒汙染的證據。1982年8月，R·A·Van Deusen將MDBK(NBL-1)提供給ATCC時，已傳(chuan) 代至第110代；MDBK(NBL-1)細胞未被BVDV感染。

生物安全等級 2

生長培養(yang) 基 RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S

推薦傳(chuan) 代比例 1:2-1:4

推薦換液頻率 2~3次/周

倍增時間 ~35小時

凍存條件

凍存液：55% 基礎培養(yang) 基+40%FBS+5%DMSO

溫度：液氮

培養(yang) 條件

氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

基因表達情況 keratin

保藏機構 ATCC; CCL-22 ATCC; CRL-6071DSMZ; ACC-174 ECACC; 90050801
細胞係培養(yang) 步驟：

細胞係培養(yang) ‌的步驟主要包括細胞複蘇、細胞傳(chuan) 代和細胞凍存。

細胞複蘇‌：

將凍存細胞從(cong) 液氮中取出後，在37℃水浴鍋內(nei) 不斷搖動促進其融化。

將融化的細胞移入離心管中，加入37℃預熱的DMEM培養(yang) 基中（其中胎牛血清約為(wei) 10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM培養(yang) 基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yang) 基，輕輕吹打混勻，製成細胞懸液，接種於(yu) 培養(yang) 皿/瓶中，在含5% CO2的細胞培養(yang) 箱中培養(yang) 。

細胞傳(chuan) 代‌：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養(yang) 基，用1X PBS清洗2次。

加入進行消化，放入細胞培養(yang) 箱中約2-3min。

加入適量DME培養(yang) 基終止消化，轉移至離心管後500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yang) 基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yang) 基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進行計數，然後按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養(yang) 箱繼續培養(yang) 。

‌細胞凍存‌：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養(yang) 基，用1X PBS清洗2次。

加入行消化，放入細胞培養(yang) 箱中約2-3min。

加入DMEM培養(yang) 基終止消化，轉移至離心管後500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yang) 基清洗，棄上清液。

這些步驟確保了細胞的生長和繁殖能夠在體(ti) 外環境中得到有效的維持和擴展，為(wei) 科學研究提供了大量的細胞樣本‌。

‌細胞係培養(yang) ‌的步驟主要包括細胞複蘇、細胞傳(chuan) 代和細胞凍存。

細胞複蘇‌：

將凍存細胞從(cong) 液氮中取出後，在37℃水浴鍋內(nei) 不斷搖動促進其融化。

將融化的細胞移入離心管中，加入37℃預熱的DMEM培養(yang) 基中（其中胎牛血清約為(wei) 10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。加入DMEM培養(yang) 基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yang) 基，輕輕吹打混勻，製成細胞懸液，接種於(yu) 培養(yang) 皿/瓶中，在含5% CO2的細胞培養(yang) 箱中培養(yang) 。

細胞傳(chuan) 代‌：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養(yang) 基，用1X PBS清洗2次。

加入進行消化，放入細胞培養(yang) 箱中約2-3min。

加入適量DMEM培養(yang) 基終止消化，轉移至離心管後500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yang) 基清洗，棄上清液。加入DMEM培養(yang) 基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進行計數，然後按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養(yang) 箱繼續培養(yang) 。

細胞凍存‌：

當細胞密度達到80%~90%時，去掉培養(yang) 基，用1X PBS清洗2次。

加入進行消化，放入細胞培養(yang) 箱中約2-3min。

加入DMEM培養(yang) 基終止消化，轉移至離心管後500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM培養(yang) 基清洗，棄上清液。

這些步驟確保了細胞的生長和繁殖能夠在體(ti) 外環境中得到有效的維持和擴展，為(wei) 科學研究提供了大量的細胞樣本‌

細胞接收後的處理：

1）MDBKNBL-1牛腎細胞係收到細胞後，75%酒精瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 售後時收到時細胞狀態的依據

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yang) 箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會(hui) 因振動脫落和脫落後成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yang) 瓶中灌液培養(yang) 基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yang) 瓶中）,加入新配製的培養(yang) 基6-8mL，放到細胞培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳(chuan) 代處理。傳(chuan) 代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的完培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。  收到細胞後次傳(chuan) 代建議T25培養(yang) 瓶1：2傳(chuan) 代 。                      

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1） 準備MEM培養(yang) 基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yang) 條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

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