細胞介紹

該細胞能合成複合胺，腎上腺素。

細胞特性

1）來源：人結腸癌

2）形態：貼壁生長，貼不牢

3）含量：>1x106細胞數

4）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5）用途：僅(jin) 供科研使用。

運輸和保存：幹冰運輸及複蘇好存活細胞：

（1）1mL凍存管包裝幹冰運輸，收到後-80度冰箱保存過夜後轉入液氮或直接複蘇，若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染，請立即與(yu) 我們(men) 聯係。

（2）T25瓶複蘇的存活細胞常溫發貨，收到後按照細胞接收後的處理方法操作。

細胞接收後的處理：

1）收到細胞後，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱放置約2-3h，若發現培養(yang) 瓶破損、有液溢出及細胞有汙染，請拍照後及時聯係我們(men) 。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yang) 瓶外觀照片一張留存，作為(wei) 售後時收到時細胞狀態的依據。

3）半貼細胞和貼壁不牢（懸浮）細胞：T25瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中約2-3h，顯微鏡下觀察細胞的情況，若細胞密度在60%以下，客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心後用培養(yang) 基重懸後打回到原培養(yang) 瓶中繼續培養(yang) ，若細胞生長70%-90%對細胞進行傳(chuan) 代，傳(chuan) 代時需要收集培養(yang) 基中懸浮的細胞離心後回收。

備注：運輸用的培養(yang) 基（灌液培養(yang) 基）不能再用來培養(yang) 細胞，請換用按照說明書(shu) 細胞培養(yang) 條件新配製的培養(yang) 基來培養(yang) 細胞。收到細胞後第一次傳(chuan) 代建議T25培養(yang) 瓶1：2傳(chuan) 代。

一．培養(yang) 基及培養(yang) 凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yang) 基；優(you) 質胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2）培養(yang) 條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yang) 箱濕度為(wei) 70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。

二．細胞處理：

1）凍存細胞的複蘇：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yang) 基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yang) 基重懸細胞。然後將細胞懸液加入含6-8ml培養(yang) 基的培養(yang) 瓶（或皿）中37℃培養(yang) 過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2）細胞傳(chuan) 代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang) 。該細胞為(wei) 懸浮和輕微的貼壁細胞，傳(chuan) 代可以參考以下方法：

1、收集：將培養(yang) 瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由於(yu) 細胞貼壁不牢PBS潤洗後細胞會(hui) 脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2、加入0.25％（w / v）胰dan白酶-0.53 mM EDTA於(yu) 培養(yang) 瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓並脫落迅速拿回操作台，輕敲幾下培養(yang) 瓶後加入3-4ml含10%FBS的培養(yang) 基來終止消化。

3、將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yang) 液後重懸混勻後將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書(shu) 要求配置的新的培養(yang) 基以保持細胞的生長活力，後續傳(chuan) 代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存:收到細胞後建議在培養(yang) 前3代時凍存一批細胞種子以備後續實驗使用。下麵T25瓶為(wei) 例：

1、細胞凍存時按照細胞傳(chuan) 代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決(jue) 定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為(wei) 1×106~1×107個(ge) 活細胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配製好的細胞凍存液重懸細胞，按每1ml凍存液含1×106~1×107個(ge) 活細胞/ml分配到一個(ge) 凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。

3、將要凍存的細胞置於(yu) 程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之後轉入液氮容器中儲(chu) 存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便後續查閱和使用。

注意事項：

1、所有動物細胞均視為(wei) 有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全台內(nei) 操作，並請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟(diu) 棄。

2、建議在複蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護麵罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會(hui) 泄漏，並會(hui) 慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從(cong) 而產(chan) 生飛揚的碎屑造成人員傷(shang) 害。

使用範圍

本產(chan) 品僅(jin) 限於(yu) 科學研究，絕不可作為(wei) 動物或人類疾病的治療產(chan) 品使用。