實驗要點及說明：
1．本方法適用於(yu) 貼壁細胞培養(yang) ，而不適用於(yu) 懸浮細胞培養(yang) ，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為(wei) 優(you) 質玻璃，並經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養(yang) 皿，但不宜過大，以避免培養(yang) 液的浪費和增加汙染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鍾並自然晾幹。
公司細胞廣泛用於(yu) 國內(nei) 院校的細胞生物學研究，作為(wei) 實驗項目研究。下列產(chan) 品詳細介紹：
產(chan) 品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
肝癌細胞；Hep3B2.1-7 | 貼壁生長 | EY-X63560 |
細胞名稱 肝癌細胞；Hep3B2.1-7
形態特性: 上皮細胞
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細胞係來自8歲男性黑人的組織。其染色體(ti) 模式數目為(wei) 60，在裸鼠中能致瘤。已知該細胞係含有與(yu) 人類疾病有關(guan) 的因子，需在2級生物安全防護下操作。
培養(yang) 條件: MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle'sBalancedSalts)優(you) 質胎牛血清，10%
傳(chuan) 代方法: 消化3-5分鍾。1:2。3天內(nei) 可長滿。
傳(chuan) 代情況: P(154+5)
凍存條件: 基礎培養(yang) 基+8%DMSO+20%FBS
支原體(ti) 檢測: 陰性
冷凍保存細胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置於(yu) 4℃ 30~60 分鍾→ （-20 ℃30 分鍾*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 儲(chu) 存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置於(yu) 已設定程序之可程序降溫機中每分鍾降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase儲(chu) 存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
實驗報告：
一、分離與(yu) 培養(yang) ：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然後用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之後用滴管吹打製成單細胞懸液，自然沉澱並收集上清，用含10% FBS培養(yang) 基終止消化後4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min後，按上述方法收集上清並終止消化後4℃放置，重複此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不鏽鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉澱細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yang) 基混懸，接種於(yu) 25cm2培養(yang) 瓶，放置於(yu) 37℃ ，5％CO2 培養(yang) 箱中培養(yang) ；
5、差速貼壁1h後，吸出培養(yang) 基，按實驗需要接種於(yu) 6孔板中繼續培養(yang) ；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yang) 基，用溫育的PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS衝(chong) 洗細胞2次，每次10min，然後在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然後將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS衝(chong) 洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS衝(chong) 洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像並拍照。
操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養(yang) 液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yang) 液洗滌細胞一次，以去除殘餘(yu) 的血清。
②加入少量 生物 Trypsin-EDTA solution，略蓋過細胞即可，室溫放置 0.5～2min， 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，並且肉眼觀察培養(yang) 器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化；或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來，吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養(yang) 液，吹打下細胞，即可直接用於(yu) 後續實驗。
④如果發現消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長，未及吹打細胞，細胞已經有部分直接從(cong) 培養(yang) 器皿底部脫落， 直接用細胞培養(yang) 液把細胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉澱細胞，盡量去除細胞消化液後，加入含血清的*培養(yang) 液重新懸浮細胞，即可用於(yu) 後續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化後可以充分打散組織為(wei) 宜。
TenuibacillusRITA (NSC 652287)Human SMARCD2 ELISA Kit
小鼠雜交瘤；IIB11拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae2-二環己膦基-2'-(N,N-二)-聯苯Human SLTM ELISA Kit
小鼠雜交瘤；2D6C1C2C5拉丁屬名: Pseudomonas mandelii2-二環己膦基-2'-(N,N-二)-聯苯Human SLC6A8 ELISA Kit
小鼠雜交瘤；2G9B9H6A2拉丁屬名: Bacillus subtilis4-甲硫基苯Human SLC5A8 ELISA Kit
小鼠雜交瘤；IIIF9拉丁屬名: Caulobacter henricii4-甲硫基苯Human SLC38A3 ELISA Kit
抗人TATA box結合蛋白反應蛋白單抗雜交瘤；1E2D6拉丁屬名: Ophiocordyceps sinensis(3aR,8aR)-(-)-(2,2-Dimethyl-4,4,8,8-tetraphenyl-tetrahydro-[1,3]dioxolo[4,5-e][1,3,2]dioxaphosphepin-6-yl)dimethylamine.Human SLC7A4 ELISA Kit
抗人磷脂酰肌蛋白聚糖前體蛋白單抗雜交瘤；3A11C7H4D5拉丁屬名: Penicillium chrysogenum4-溴-3-氯苯Human SMAP1 ELISA Kit
抗人fusion單抗雜交瘤；1F4E6A2拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae4-溴-3-氯苯Human SMCR7/MID49 ELISA Kit
抗人BCS1-like小鼠雜交瘤；1C3C12A2拉丁屬名: Streptomyces fulvoviolaceusa-葡糖-a-葡糖苷Human SMAP2 ELISA Kit
抗人微管a蛋白單抗雜交瘤；2C10D7B5B2拉丁屬名: Sphaerisporangium viridialbum2'-O-甲基鳥苷Human LMTK3(Serine/threonine-protein kinase LMTK3) ELISA Kit
抗NADH脫氫酶亞單位1單抗雜交瘤；LP-NADH-F11用途: 其中與山螞蝗等豇豆屬植物共生固氮2'-O-甲基鳥苷Human SMCHD1 ELISA Kit
抗P24蛋白單抗雜交瘤；8H1拉丁屬名: septicum2'-甲氧基胞苷Human SMARCA4 ELISA Kit
抗GST蛋白單抗雜交瘤；4F10拉丁屬名: Bacillus subtilis2'-甲氧基胞苷Human SMCR7L ELISA Kit
小鼠雜交瘤；2B10G10D10F7拉丁屬名: Arthrobacter sp.3-溴代苯乙酮Human SMG5 ELISA Kit
小鼠雜交瘤；3D2拉丁屬名: Hannaella oryzae3-溴代苯乙酮Human SLC5A11 ELISA Kit
小鼠雜交瘤；1F3拉丁屬名: Vibrio natriegens3-溴代苯乙酮Human SMARCA5 ELISA Kit
小鼠雜交瘤；1H8拉丁屬名: Bacillus subtilis3-溴代苯乙酮Human SLN ELISA Kit
小鼠雜交瘤；1H6拉丁屬名: Avian encephalomyetitis virus鄰氯苯乙酮Human SMARCAL1 ELISA Kit
小鼠雜交瘤；IIIA3a用途: 藥用鄰氯苯乙酮Human SLC5A8
肝癌細胞；Hep3B2.1-7人布魯氏菌抗體(ti) IgG(BrucellaAbIgG)ELISA試劑盒SLCELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人囊蟲病抗體(ti) (CYTAb)ELISA試劑盒SLEELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人白喉抗體(ti) (DiphtheriaAb)ELISA試劑盒sLRELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人阿米巴(Amebiasis)ELISA試劑盒sLRELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人鉤端螺旋體(ti) IgG(Lebtospira)ELISA試劑盒sLRELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人鉤端螺旋體(ti) IgM(Lebtospira)ELISA試劑盒smActinin-αELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人破傷(shang) 風抗體(ti) (TetanusAb)ELISA試劑盒smActinin-αELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
人旋毛蟲抗體(ti) (TrichinellaAb)ELISA試劑盒smActinin-αELISAKit產(chan) 品規格:48T/96T。
