兔原代椎間盤纖維環原代細胞

商品屬性：

形態：多角形細胞，不規則
培養(yang) 基：兔椎間盤纖維環細胞wan全培養(yang) 基

培養(yang) 環境：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳(chuan) 代特征：可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態

細胞基本屬性：

種屬來源：兔

組織來源：椎間盤椎間盤

生長特性：貼壁生長

產(chan) 品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：

產(chan) 品貨期：5-6周左右

運輸方式：T25培養(yang) 瓶/ 順豐(feng) 快遞（包郵）

供應限製：僅(jin) 限於(yu) 科學研究，絕不可作為(wei) 動物或人類疾病的治療產(chan) 品使用

背景介紹：:兔椎間盤纖維環細胞采用膠原酶-中性蛋bai酶聯合消化法並結合軟骨細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基培養(yang) 篩選製備而來，兔椎間盤纖維環細胞分離自椎間盤組織；椎間盤是位於(yu) 脊柱兩(liang) 椎體(ti) 之間，由軟骨板、纖維環、髓核組成的一個(ge) 密封體(ti) 。上下有軟骨板，是透明軟骨複蓋於(yu) 椎體(ti) 上，下麵骺環中間的骨麵。上下的軟骨板與(yu) 纖維環一起將髓核密封起來。纖維環由膠原纖維束的纖維軟骨構成，位於(yu) 髓核的四周。纖維環的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環成為(wei) 堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。纖維環的前側(ce) 及兩(liang) 側(ce) 較厚，而後側(ce) 較薄。纖維環的前部有強大的前縱韌帶，後側(ce) 的後縱韌帶較窄、較薄。纖維環細胞密度為(wei) 9000個(ge) 細胞/mm3，其外層的細胞呈梭型，主要屬於(yu) 纖維細胞，內(nei) 層細胞呈圓形，主要屬於(yu) 軟骨細胞。在培養(yang) 的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結構表現，它們(men) 的核較圓，核仁較明顯。細胞質內(nei) 可見大量的附有核糖體(ti) 顆粒的粗麵內(nei) 質網和滑麵內(nei) 質網。細胞質內(nei) 線粒體(ti) 多，為(wei) 橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級深酶體(ti) 和次級深酶體(ti) 。細胞質內(nei) 有一係列的扁平囊及小泡主成的高爾基複合體(ti) 和分泌顆粒，纖維環細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛，保證纖維環生理代謝活動所需的構造物質的供給。一但這種供給減少，纖維環的生物性能就會(hui) 減弱，椎間盤開始退變。

原代細胞培養(yang) 的主要步驟包括：

‌一、剝離組織，去除外膜、結締組織等‌：將組織從(cong) 動物體(ti) 中取出，並去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、‌洗滌後將組織剪成1mm左右的小塊‌：使用生理鹽水或其他適當的緩衝(chong) 液洗滌組織，然後將其剪成約1mm大小的小塊。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩衝(chong) 液中，進行消化。消化時間可根據具體(ti) 實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

‌四、吹打分散後，過濾、計數‌：將消化後的細胞吹打到一個(ge) 離心管中，然後過濾、計數。

五、‌按30萬(wan) /毫升分瓶培養(yang) ‌：將計數後的細胞按30萬(wan) /毫升的濃度分瓶培養(yang) 。

細胞培養(yang) 操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yang) 瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

傳(chuan) 代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang)

傳(chuan) 代代數可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態

傳(chuan) 代比例傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代，1:2傳(chuan) 代就是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) T25瓶或者2個(ge) 6cm皿。不是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) 10cm皿

傳(chuan) 代方法：

1.吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yang) 瓶中，輕微轉動培養(yang) 瓶至消化液覆蓋整個(ge) 培養(yang) 瓶底後，吸出多餘(yu) 消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後，再加入5ml培養(yang) 基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yang) 瓶傳(chuan) 代，然後補充新鮮的培養(yang) 基至5mL，置於(yu) 37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) ；

4.待細胞貼壁後，培養(yang) 觀察；之後每2-3天換液一次新鮮的培養(yang) 基。

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