兔原代臍帶間充質幹原代細胞

商品屬性：

形態：成纖維細胞樣
培養(yang) 基：兔臍帶間充質幹細胞wan全培養(yang) 基

培養(yang) 環境：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳(chuan) 代特征：可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態最佳

細胞基本屬性：

種屬來源：兔

組織來源：臍帶臍帶

生長特性：貼壁生長

產(chan) 品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：

產(chan) 品貨期：5-6周左右

運輸方式：T25培養(yang) 瓶/ 順豐(feng) 快遞（包郵）

供應限製：僅(jin) 限於(yu) 科學研究，絕不可作為(wei) 動物或人類疾病的治療產(chan) 品使用

背景介紹：:兔臍帶間充質幹細胞采用組織貼塊法製備而來，兔臍帶間充質幹細胞分離自臍帶；臍帶是哺乳類的連接胎兒(er) 和胎盤的管狀結構。原來是由羊膜包卷著卵黃囊和尿膜的柄狀伸長部而形成的。臍帶中通過尿膜的血管即臍動脈和臍靜脈，卵黃囊的血管即臍腸係膜動脈及臍腸係膜靜脈。當卵黃囊及其血管退化，臍動脈和臍靜脈就發達起來，在這些間隙中可以看到疏鬆的膠狀的間充質。在子宮中，子宮動脈在胎盤的母體(ti) 部分出的毛細血管，與(yu) 胎盤的子體(ti) 部胎兒(er) 毛細血管靠近，在此處母體(ti) 和胎兒(er) 的血液間進行CO2和O2，代謝產(chan) 物即代謝廢物和營養(yang) 物質的交換。臍動脈將胎兒(er) 來的廢物運送至胎盤，臍靜脈將O2和營養(yang) 物質從(cong) 胎盤運送給胎兒(er) 。後由子宮靜脈將來自胎兒(er) 的代謝廢物運走，某種激素和抗體(ti) 等也通過臍帶從(cong) 母體(ti) 移交給胎兒(er) 。臍帶中含有大量的幹細胞，幹細胞是生命的種子，它會(hui) 分化成機體(ti) 的各種細胞，結出各種不同的果實——血液細胞、神經細胞、骨骼細胞等。幹細胞是具有自我更新、高度增殖和多項分化潛能的細胞群體(ti) ；這些細胞可以通過分裂維持自身細胞的特性和數量，又可進一步分化為(wei) 各種組織細胞，從(cong) 而在組織修複等方麵發揮積極作用。間充質幹細胞（MSC）是一種具有高度自我更新和多向分化潛能的幹細胞。在不同的誘導條件下，可分化為(wei) 多種造血細胞以外的組織細胞，並具有造血支持、免疫調節、組織修複等作用；目前，多用於(yu) 風濕免疫疾病的治療。間充質幹細胞（MSCs）是一種具有自我更新和多向分化潛能的成體(ti) 幹細胞，存在於(yu) 骨髓、脂肪組織、臍血及多種胎兒(er) 組織。它可分泌多種細胞因子及生長因子，促進造血幹細胞（HSC）的增殖與(yu) 分化。MSCs還具有免疫調節、抗炎和組織修複作用，可減輕移植物抗宿主病（GVHD）及其他移植相關(guan) 並發症。臍帶間充質幹細胞是一種多能幹細胞，是具有自我複製能力的多潛能細胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞。在胚胎發育中來源於(yu) 中胚層。在機體(ti) 正常的組織損傷(shang) 修複過程中，MSC是一種重要的參與(yu) 組織再生的細胞庫。在組織損傷(shang) 引起的特殊信號作用下，MSC遷移到受損部位，在局部聚集增殖，依據不同的損傷(shang) 信號沿著不同途徑分化。MSC易於(yu) 分離擴增，體(ti) 外倍增能力旺盛，即使擴增1億(yi) 倍仍能保持其多向分化能力。因此，MSC是一種實用的組織修複種子細胞。相較於(yu) 其他幹細胞，臍帶間充質幹細胞具有來源方便，細胞數量充足，易於(yu) 分離、培養(yang) 、擴增和純化，傳(chuan) 代擴增30多代後仍具有幹細胞特性。臍帶是目前間充質幹細胞的佳來源。

原代細胞培養(yang) 的主要步驟包括：

‌一、剝離組織，去除外膜、結締組織等‌：將組織從(cong) 動物體(ti) 中取出，並去除可能存在的外膜或結締組織等雜質。

二、‌洗滌後將組織剪成1mm左右的小塊‌：使用生理鹽水或其他適當的緩衝(chong) 液洗滌組織，然後將其剪成約1mm大小的小塊。

三、‌用0.1%～0.2%的消化‌：將剪碎的組織塊加入含有0.1%～0.2%的緩衝(chong) 液中，進行消化。消化時間可根據具體(ti) 實驗需求選擇熱消化（37℃）或冷消化（4℃），熱消化時間短，冷消化時間長但條件更溫和。

‌四、吹打分散後，過濾、計數‌：將消化後的細胞吹打到一個(ge) 離心管中，然後過濾、計數。

五、‌按30萬(wan) /毫升分瓶培養(yang) ‌：將計數後的細胞按30萬(wan) /毫升的濃度分瓶培養(yang) 。

細胞培養(yang) 操作：

收貨處理取出T25細胞培養(yang) 瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2，飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置3-4h，以穩定細胞狀態

傳(chuan) 代密度細胞密度達80%-90%，即可進行傳(chuan) 代培養(yang)

傳(chuan) 代代數可傳(chuan) 5代左右；3代以內(nei) 狀態

傳(chuan) 代比例傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代，1:2傳(chuan) 代就是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) T25瓶或者2個(ge) 6cm皿。不是1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) 10cm皿

傳(chuan) 代方法：

1.吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次；

2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yang) 瓶中，輕微轉動培養(yang) 瓶至消化液覆蓋整個(ge) 培養(yang) 瓶底後，吸出多餘(yu) 消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後，再加入5ml培養(yang) 基終止消化；

3.用吸管輕輕吹打混勻，按1:2比例接種T25培養(yang) 瓶傳(chuan) 代，然後補充新鮮的培養(yang) 基至5mL，置於(yu) 37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) ；

4.待細胞貼壁後，培養(yang) 觀察；之後每2-3天換液一次新鮮的培養(yang) 基。

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